自体骨瓣多孔冲洗后的低温保存回植研究

发布时间：2020-03-29 07:11

【摘要】：目的:采用成年、健康、雄性的新西兰大白兔建立手术颅骨缺损模型,对取下骨瓣进行内外板多处打孔(非交通性)、低温保存液冲洗、程序化冻存3 m,复温后24 h培养液体外培养等处理后自体回植4 w,评价多孔冲洗后自体骨瓣的低温保存回植是否降低炎症反应和骨质吸收发生率,增加回植骨瓣(replanted bone flap,RBF)血管内皮细胞数(vascular endothelial cells,VECs)。方法:成年、健康、雄性新西兰白兔16只,体重(2±0.2)kg,统一建立白兔左侧顶骨约1.0×1.0cm2四边形缺损模型后随机分为实验组和对照组,每组8只。实验组对取下骨瓣进行内外板多处打孔(非交通性)、低温保存液冲洗、程序化冻存3 m,复温后24 h培养液体外培养等处理后自体回植4 w;对照组对取下骨瓣进行内外板多处打孔(非交通性)、低温保存液中程序化冻存3 m,复温后24h培养液体外培养等处理后自体回植4 w。骨瓣自体回植后于第1、3、7、14 d抽取兔血清检测IL-1、TNF-α浓度;回植4 w后,再次于回植骨瓣边缘外2-3mm取下完整骨瓣,观察回植骨瓣大体形态,并进行HE染色及免疫组化血管内皮细胞计数。结果:1、白兔骨瓣回植后第1、3、7、14 d,通过抽白兔耳缘静脉血检测IL-1、TNF-α浓度,与对照组相比,实验组白兔血清IL-1、TNF-α浓度在第1、3、7、14 d均低,差异具有统计学意义(P0.05)。2、实验过程中白兔全部存活,大体状况良好。取回植骨瓣时,可见回植骨瓣呈白色,周边颅骨呈鲜红色,回植骨瓣内板及外板周围可见骨痂形成。实验组回植骨瓣未见骨质吸收(骨质吸收发生率0/8);对照组回植骨瓣出现3例骨质吸收(骨质吸收发生率3/8)。3、HE切片可见回植骨瓣与原颅骨缺损处愈合,界限分明。显微镜下观察HE染色切片,见回植骨瓣愈合,愈合处可见形成新的骨痂形成,并可见骨细胞。4、CD31免疫组化结果示回植骨瓣内有染成棕黄色的血管内皮细胞,与对照组相比,实验组VECs明显增多。结论:多孔冲洗自体骨瓣后程序化冻存及复温可以降低炎症反应和骨质吸收发生率,增加回植骨瓣的VECs。
【图文】：

模拟图,骨瓣,模拟图

0.2ml/kg 诱导麻醉，20%乌拉坦 5ml/kg 腹腔维持麻醉。通过白兔角膜反射、肌张力、疼痛反射等判断麻醉程度，待麻醉完成后，剪刀剪去白兔颅骨顶部兔毛，刀片刮除残余兔毛，白兔保持俯卧位固定于动物立体定位头架（DY 1 型，天津市医疗器械研究所），，术者刷手，碘伏消毒三遍，铺巾，纵行切开头皮约 8cm，由中间向左边将骨膜剥离，暴露白兔颅骨人字缝、矢状缝和冠状缝，于左侧顶骨处用高速牙科钻取约 1.0×1.0cm2四边形骨瓣，16 只白兔共计 16 块骨瓣，并进行编号。取下的实验组骨瓣立即置于肝素生理盐水中，用 1ml 注射器针头间隔3mm 于内、外板扎孔，穿刺过程中出现突破感时停止进针并拔出，由针孔处观察到血液渗出，确保针尖仅穿孔至板障而不穿透骨瓣。以注射器抽取 1ml 肝素生理盐水对每个针孔进行冲洗，冲洗出的液体逐渐清亮，且整体骨瓣颜色逐渐变白（图 1）。随后骨瓣置于含 10%二甲基亚砜（Dimethyl Sulphoxide, DMSO）的胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）中，利用程序化冷冻方法，4℃冰箱冷藏30 min，随后-20℃冻存 2h，最后-80℃低温冻存 3 m。对照组除不进行骨瓣冲洗外，余操作同实验组。骨瓣取下处理同时，助手进行兔术区止血、缝合等操作，并肌注庆大霉素 0.2mL/kg 预防感染，放回笼内，每日观察伤口。

形态图,形态,骨瓣,外板

图 2 取骨瓣前后大体形态。牙科转钻 4 孔及手术剪刀剪取骨瓣大体形态（A）；骨瓣取下后大体形态（B）。2.2 骨瓣钻孔、冲洗后大体形态用 1ml 注射器针头间隔 3mm 于对骨瓣内、外板扎孔，实验组骨瓣通过注射器抽取 1ml 肝素生理盐水对每个针孔进行冲洗骨瓣内、外板（非交通性）。冲洗前，骨瓣充满血液，呈暗红色；冲洗后，骨瓣内血液大部分冲出且整体骨瓣颜色逐渐变白（图 3）。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R651.1

【参考文献】