腺病毒沉默HIF-1α及舒洛地特对低氧状态下人真皮微血管内皮细胞凋亡的影响

发布时间：2020-04-06 10:47

【摘要】：第一部分腺病毒沉默HIF-1α对低氧状态下人真皮微血管内皮细胞凋亡的影响目的:探索沉默HIF-1α对低氧状态下人真皮微血管内皮细胞(human dermal microvascular endothelial cells,HDMECs)凋亡的影响及潜在机制。方法:通过三气低氧孵箱构建细胞低氧环境;构建腺病毒沉默HIF-1α基因的表达。HDMECs经分组培养后,通过流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot及RT-PCR检测蛋白和m RNA的表达。结果:HDMECs的凋亡率及HIF-1α的表达随氧浓度的降低而增加,随低氧时间的增加而增加;HIF-1αsi RNA腺病毒抑制了低氧状态下HDMECs中HIF-1α约74%的表达,且凋亡率增加。HIF-1α的敲低上调了P53和BAX蛋白的表达,下调BCL-2、VEGF和GLUT1蛋白的表达。结论:低氧状态下HDMECs的凋亡率存在明显的氧浓度依赖性和时间依赖性;HIF-1α可通过影响线粒体凋亡通路一定程度上减轻低氧对细胞的损伤,其潜在机制可能与促进新生血管和增加葡萄糖摄取有关。第二部分舒洛地特对低氧状态下人真皮微血管内皮细胞凋亡的影响目的:探讨舒洛地特(sulodexide,SDX)对低氧状态下人真皮微血管内皮细胞(human dermal microvascular endothelial cells,HDMECs)凋亡的影响及其分子机制;方法:对HDMECs进行分组培养:常氧对照组(在常氧状态培养);低氧对照组于1%O2、5%CO2、37°C条件孵箱培养24 h;处理组用不同浓度(0.25、0.50、1.00 LSU/m L)舒洛地特作用于HDMECs低氧培养24 h;CCK8法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;caspase3活性检测试剂盒测定细胞内caspase3活性;Western blot和实时荧光定量PCR检测促凋亡基因P53、Bax、caspase3和抑凋亡基因Bcl2的蛋白及m RNA表达。结果:低氧状态下舒洛地特可提高HDMECs生长活力,降低其凋亡率,抑制促凋亡基因P53、Bax和caspase3的蛋白与m RNA表达以及caspase3的活性,提高抑凋亡基因Bcl2的蛋白与m RNA表达。结论:舒洛地特可以抑制低氧状态下人真皮微血管内皮细胞的凋亡,其分子机制与抑制线粒体凋亡通路有关。
【图文】：

图 1.1 不同氧浓度对 HDMECs 调亡及 HIF-1a 表达的影响Figure 1.1 The effect of different oxygen concentrations on the apoptosis and HIF-1aexpression of HDMECs .A-B: The quantitative analysis of the apoptotic rates between groups.C-E: The analysis of HIF-1a protein and mRNA expression between groups. Mean SD, n=3.＊P<0.05 vs 21% O2 group; ＃P<0.05 vs 5% O2 group.

图 1.2 不同低氧时间对 HDMECs 调亡及 HIF-1a 表达的影响Figure 1.2 The effect of different levels of hypoxic time on apoptosis and HIF-1a expression ofHDMECs.A-B: The quantitative analysis of the apoptotic rates between groups. C-E: Theanalysis of HIF-1a protein and mRNAexpression between groups. Mean SD, n=3. ＊P<0.05vs 0h hypoxia group; ＃P<0.05 vs 12h hypoxia group; △P<0.05 vs 24h hypoxia group.
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R654.4

【参考文献】

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1 舒Q，

本文编号：2616411