microRNA-486-5p调控烧冲复合伤肺损伤机制的研究

发布时间：2020-05-14 23:13

【摘要】：目的:探讨大鼠烧冲复合伤后肺组织miRNA表达变化,并初步阐明特定miRNA与肺损伤的关系。方法一:选取健康雄性SD大鼠(200-220g),随机分为假伤(CT)组和烧冲复合伤(BB)组,建立假伤和烧冲复合伤大鼠模型。利用Micro-CT、肺湿干比和HE染色等方法确认肺损伤情况。用基因芯片检测两组大鼠肺组织miRNA表达并比较差异。根据文献调研,选取关系较为紧密的miRNA用Real-time PCR复测表达以作备选,同时确认芯片结果可靠性。然后,对差异表达的miRNA作生物信息学分析,推测其可能影响的功能和通路。用TUNEL染色观察了大鼠肺组织凋亡情况。方法二:1.选取健康雄性SD大鼠(200-220g),随机均分为假伤对照(CT)组和烧冲复合伤(BB)组(n=54),伤后6h、12h、24h、36h和48h分别处死动物,取肺组织检测并留血清备用。SP-C免疫组化观察肺组织AT2损伤情况;荧光双标检测AT2是否发生凋亡;Real-time PCR检测miR-486-5p伤后表达时相变化;western blotting检测SP-C表达时相变化,分析miR-486-5p和SP-C表达的相关性。检测伤前和伤后24h肺组织IGF-1R蛋白和IGF-1RmRNA表达水平。2.选择A549细胞作体外模型。根据转染质粒和刺激所用血清分为:空载质粒+CT组血清(NS)组;空载质粒+BB组血清(NI)组;mimics质粒+CT组血清(MS)组;mimics质粒+BB组血清(MI)组;inhibitor 质粒+BB 组血清(Ⅱ)组。Real-time PCR 检测各组 miR-486-5p 和 IGF-1R mRNA表达。Western blotting检测IGF-1R及下游通路关键蛋白表达。流式细胞凋亡检测观察细胞模型凋亡水平。结果一:与CT组比较,BB组肺损伤明显,其表达9个上调的miRNA和2个下调miRNA。PCR结果与芯片结果趋势一致,提示芯片结果可靠。差异表达的miRNA最可能富集于细胞命运相关通路并与基因转录相关。BB组TUNEL染色阳性率显著高于CT组,提示凋亡可能是与差异表达miRNA有关的细胞命运之一。结果二:与CT组相比,BB组SP-C组化染色阳性率显著降低,提示AT2损伤。BB组荧光双标见TUNEL与SP-C共染,提示AT2发生凋亡。与CT组相比,BB组IGF-1R表达显著下调,而IGF-IRmRNA表达无显著改变。通过转染上调细胞miR-486-5p表达,可使细胞出现相同改变。体外模型见:烧冲复合伤血清刺激可使转染空载质粒的细胞凋亡增加;上调miR-486-5p和烧冲复合伤血清刺激具有协同作用;单独上调miR-486-5p可部分模拟烧冲复合伤血清刺激导致的细胞凋亡效果;下调miR-486-5p可部分抑制烧冲复合伤血清刺激导致的细胞凋亡效果。不同组别中,IGF-1R及下游FoxO信号通路发生相应改变。结论:1.烧冲复合伤大鼠表现出明显肺损伤,肺组织miRNA表达特征改变;2.miR-486-5p可下调其靶基因IGF-1R的蛋白表达,抑制其下游PI3K/Akt/FoxO信号通路,使凋亡相关基因转录增加,从而参与烧冲复合伤肺损伤。
【图文】：

解放军医学院博士学位论文逡逑＿ｗ．逦—逡逑刖邋目逡逑烧冲复合伤是热力和冲击波同时或相继作用于机体所形成的烧伤和冲积伤合伤。烧冲复合伤常见于军事冲突、恐怖袭击和生产意外。１近年来，恐怖主义愈演愈烈，每年死于恐袭的人数不断增高。爆炸恐袭是恐怖组织常用、威胁性最袭击方式之一，自２０１０年至２０１５年，爆炸袭击共导致１０．４８万人受伤、４．４７万亡。２在我国，烧冲复合伤伤员主要来自生产意外。近年来相关事件不断发生，如２年九月在江西发生的烟花厂爆炸、２０１７年六七月间发生在北京、杭州、锦州和的天然气爆炸等。逡逑0ａ邋Ａｓｓａｓｓｉｎａｔｉｏｎ逡逑

解放军医学院博士学位论文逡逑研宄。我们发现炎症、凋亡、氧化应激等多种导致肺损伤的因素。Ｍ然而，就笔者所逡逑知，能够改善ＡＲＤＳ预后的治疗手段仍然只有机械通气一种手段而已。这提示我们，逡逑对于肺损伤，我们还需要进行更深入的机制探讨，各种致病因素的发生机制尚需进一逡逑步明确，，从而为研宄干预措施提供理论依据。逡逑ｍｉＲＮＡ是一组具有广泛调节活性的短链非编码ＲＮＡ。它们主要通过与相应靶基逡逑因ｍＲＮＡ的３’非翻译区（３’邋ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ邋ｒｅｇｉｏｎ）互补序列结合来引起该ｍＲＮＡ降逡逑解或翻译抑制，进而发挥调控相关生物过程的作用。迄今，ｍｉＲＢａｓｅ数据库中共收录逡逑２２３个物种的３５８２８条成熟ｍｉＲＮＡ，其中包含人类成熟ｍｉＲＮＡ达２５８８条。１１４４这些逡逑ｍｉＲＮＡｓ可以调控人体内６０％以上的细胞活动。１５逡逑
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R644;R563

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本文编号：2664081