硫酸氨基葡萄糖对颈椎软骨终板软骨细胞退变影响的研究

发布时间：2020-05-15 16:47

【摘要】：目的硫酸氨基葡萄糖对颈椎软骨终板软骨细胞退变影响的研究方法1.取材根据pfirrmann椎间盘退变评级准(Ⅰ-Ⅴ)共5型的人颈椎间盘软骨终板,使用酶解消化的方法获取颈椎间盘软骨终板当中的软骨细胞,并用甲苯胺蓝染色液对细胞进行检测鉴定软骨细胞,使用相差显微镜来观察软骨细胞的生长情况并用比色法绘制生长曲线。2.从软骨终板中成功分离出软骨细胞在体外培养至3代,每一型中取一组典型细胞分别标记为A、B、C、D、E五组,每组实验设为对照组和实验组(实验组为10μM、100μM、1000μM浓度硫酸氨基葡萄糖)分别干预72小时,通过q-PCR检测Ⅱ型胶原、多聚蛋白聚糖(Aggrecan)、MMP-3和MMP-13基因的表达。结果一、利用酶消化法获得了形态正常,获取大量纯净的软骨细胞,并能在体外稳定增殖。二、1、GS对多聚蛋白聚糖(Aggrecan)基因表达(1)A组:GS浓度为10μΜ下调Aggrecan基因的表达,GS浓度为100μΜ、1000μΜ时上调Aggrecan基因的表达;B、C组:GS浓度为10μΜ上调Aggrecan基因的表达,GS浓度为100μΜ、1000μΜ时下调Aggrecan基因的表达;D组:GS浓度为10μΜ、100μΜ时上调Aggrecan基因的表达,GS浓度为10μΜ上调Aggrecan基因的表达;E组:GS浓度为10μΜ上调Aggrecan基因的表达,GS浓度为10μΜ、100μΜ时下调Aggrecan基因的表达。(2)GS为0、10μΜ时,B、C、D、E与A相比上调Aggrecan基因的表达;GS为100μΜ时,B、C、D、E与A相比都下调Aggrecan基因的表达;GS为1000μΜ时,B、D、E与A相比都上调Aggrecan基因的表达,C与A相比下调Aggrecan基因的表达。2、GS对Ⅱ型胶原的基因表达(1)A、B组:GS浓度为10μΜ、100μΜ时,上调Ⅱ型胶原的基因表达,GS浓度为1000μΜ时,上调Ⅱ型胶原的基因表达;C、D、E组:GS浓度为100μΜ、100μΜ、1000μΜ时,下调Ⅱ型胶原的基因表达;(2)GS在0、10μΜ时,B、C、D与A相比都上调Ⅱ型胶原的基因的表达,E与相比下调Ⅱ型胶原基因的表达;GS为100μΜ时,B、C、D、E与A相比都下调Ⅱ型胶原基因的表达;GS为1000μΜ,B、D、E与A相比都上调Ⅱ型胶原基因的表达,C与A相比下调Ⅱ型胶原基因的表达。3、GS对MMP-3基因表达(1)A、D组:GS浓度为10μΜ、100μΜ、1000μΜ时上调MMP-3基因表达;B组:GS浓度为10μΜ、100μΜ时下调MMP-3基因表达,GS浓度为1000μΜ时上调MMP-3基因表达;C组:GS浓度为10μΜ、100μΜ时上调MMP-3基因表达,GS浓度为1000μΜ时下调MMP-3基因表达;E组:GS浓度为10μΜ、1000μΜ时上调MMP-3基因表达,GS浓度为100μΜ下调MMP-3基因表达;(2)GS的浓度10μΜ:B、C、D、E与A相比上调MMP-13基因的表达;GS的浓度为100μΜ:B、E与A相比是上调MMP-13基因的表达,C、D与A相比都是下调MMP-13基因的表达;GS的浓度为1000μΜ:B、D与A相比上调MMP-13基因的表达,C、E与A相比下调MMP-13基因的表达。4、GS对MMP-13基因表达(1)A、B、C组:GS浓度为10μΜ、100μΜ、1000μΜ时上调MMP-13基因表达;D组:GS浓度为10μΜ、100μΜ时下调MMP-13基因表达,GS浓度为1000μΜ时上调MMP-13基因表达;D组:GS浓度为10μΜ、1000μΜ时下调MMP-13基因表达,GS浓度为100μΜ时上调MMP-13基因表达;(2)GS在0、10μΜ时B、C、D、E与A相比下调MMP-13基因的表达;GS为100μΜ时,B、C、D、与A相比下调MMP-3基因的表达,E与A相比下调MMP-3基因的表达;GS为1000μΜ时,C、D、E与A相比下调MMP-3基因的表达,B与A相比下调MMP-3基因的表达。结论:1、GS对聚集蛋白聚糖(Aggrecan)基因表达:10μΜ浓度GS上调Ⅰ-Ⅴ型退变颈椎软骨软骨终板软骨细胞中的聚集蛋白聚糖(Aggrecan)基因表达;100、1000μΜ的GS下调Ⅰ-Ⅴ型退变颈椎软骨软骨终板细胞中聚集蛋白聚糖(Aggrecan)基因表达。2、GS对Ⅱ型胶原蛋白基因表达:10μΜ、100μΜ浓度GS上调Ⅰ、Ⅱ型退变颈椎软骨终板软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白基因表达,下调Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型退变颈椎软骨终板软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白基因表达;1000μΜ浓度GS下调Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型退变颈椎软骨终板软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白基因表达。3、GS对MMP-3基因表达:10μΜ浓度GS上调Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型退变颈椎软骨终板软骨细胞MMP-3基因表达,下调Ⅱ型退变颈椎软骨终板软骨细胞MMP-3基因表达;100μΜ浓度GS上调Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型退变颈椎软骨终板软骨MMP-3细胞基因表达,下调Ⅱ、Ⅴ型退变颈椎软骨终板软骨细胞MMP-3基因表达;1000μΜ浓度GS上调Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ型退变颈椎软骨终板软骨MMP-3细胞基因表达,下调Ⅲ型退变颈椎软骨终板软骨细胞MMP-3基因表达。4、GS对MMP-13基因表达:10μΜ浓度GS上调Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型退变颈椎软骨终板软骨细胞MMP-13基因表达,下调Ⅳ、Ⅴ型退变颈椎软骨终板软骨细胞MMP-13基因表达;100μΜ浓度GS上调Ⅰ、Ⅱ型退变颈椎软骨终板软骨MMP-13细胞基因表达,下调Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型退变颈椎软骨终板软骨细胞MMP-13基因表达;1000μΜ浓度GS上调Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、型退变颈椎软骨终板软骨MMP-13细胞基因表达,下调Ⅲ、Ⅴ型退变颈椎软骨终板软骨细胞MMP-13基因表达。说明不同浓度的GS对某些退变类型的颈椎软骨终板有一定的保护作用,但其作用机制比较复杂。
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R681.5

【参考文献】

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本文编号：2665341