超声波结合艾灸对兔膝骨性关节炎软骨、滑膜和滑液VEGF、MMP-9、TIMP-1影响的研究

发布时间：2020-05-17 00:42

【摘要】：研究目的研究超声波结合艾灸对兔膝骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型软骨、滑膜形态学变化,以及软骨、滑膜和滑液内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响,明确超声波结合艾灸治疗KOA的疗效并探讨其可能的作用机制。研究方法1 KOA动物模型建立30只6月龄新西兰大白兔随机分为手术组和正常组(E组),手术组24只,E组6只。除E组动物外,其余动物均行右膝关节前交叉韧带横断术(anterior cruciate ligament transection,ACLT)建立兔 KOA 模型;2实验动物分组术后再将手术组随机分为超声波结合艾灸组(A组)、艾灸组(B组)、超声波组(C组)和模型组(D组),每组各6只;3实验干预术后6周,除D组和E组外,分别对A组、B组、C组分别给予超声波结合艾灸、艾灸和超声波治疗2周;4实取材cwg 治疗结束后,行空气栓塞法处死动物。采集样本,肉眼观察软骨、滑膜的表观形态;5指标检测采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色,光镜下观察滑膜、软骨组织形态学;通过免疫组化检测软骨、滑膜细胞VEGF、MMP-9、TIMP-1的表达,免疫印迹法(westernblotting,WB)检测各组软骨组织中MMP-9,滑液VEGF、MMP-9、TIMP-1的蛋白表达情况;实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测软骨中 VEGFmRNA、MMP-9mRNA,以及滑液VEGFmRNA的表达。研究结果1肉眼观察软骨、滑膜的表观形态:与E组相比,A组、B组、C组、D组出现不同程度的骨性关节炎和滑膜炎组织形态学变化的表现,但A组、B组、C组的软骨表面退性行改变和滑膜炎症明显轻于D组。2软骨、滑膜HE染色评分结果:A组、B组、C组、D组的软骨、滑膜评分均高于E组,差异有统计学意义(P0.05);A组、B组、C组软骨、滑膜评分低于D组,差异有统计学意义(P0.05);A组、B组、C组软骨、滑膜评分组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。3软骨细胞和滑膜细胞免疫组化阳性表达光密度值(indicator optic density,IOD)比较:与E组相比,A组、B组、C组、D组的软骨细胞VEGF、MMP-9、TIMP-1和滑膜细胞VEGF、MMP-9、TIMP-1的IOD值均升高,差异均有统计学意义(P0.05);与D组比较,A组、B组、C组软骨细胞VEGF、MMP-9、TIMP-1和滑膜细胞VEGF、MMP-9、TIMP-1的IOD值降低,差异有统计学意义(P0.05);A组、B组、C组软骨细胞MMP-9、TIMP-1和滑膜细胞VEGF、MMP-9、TIMP-1的IOD值组间比较,差异无统计学意义(P0.05);A组、B组、C组的软骨细胞VEGF的IOD值组间比较,A组与B组、B组与C软骨细胞VEGF的IOD值比较,差异有统计学意义(P0.05)而A组与C组软骨细胞VEGF的IOD值差异无统计学意义(P0.05)。4 WB检测结果:与E组相比,A组、B组、C组、D组的软骨MMP-9和滑液VEGF、MMP-9、TIMP-1蛋白含量升高,差异有统计学意义(P0.05);与D组相比,A组、B组、C组的软骨MMP-9和滑液VEGF、MMP-9、TIMP-1蛋白含量降低,差异有统计学意义(P0.05);A组、B组、C组软骨MMP-9和滑液VEGF、MMP-9、TIMP-1蛋白含量组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。5 RT-qPCR检测结果:与E组相比,A组、B组、C组、D组中MMP-9和VEGF mRNA在软骨中的表达升高,差异有统计学意义(P0.05);与D组相比,A组、B组、C组软骨中MMP-9和VEGF mRNA的表达低于D组,差异有统计学意义(P0.05);A组、B组、C组软骨中MMP-9和VEGF mRNA表达组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。与E组比较,A组、B组、C组、D组中VEGF mRNA在滑液中表达显著升高,差异有统计学意义(P0.05);与D组比较,A组、B组、C组滑液中VEGF mRNA表达显著降低,差异有统计学意义(P0.05);A组、B组、C组滑液中VEGF mRNA表达组间比较,C组中VEGF mRNA的表达低于B组,差异有统计学意义(P0.05),A组中VEGF mRNA的表达低于C组,差异有统计学意义(P0.05),A组中VEGF mRNA的表达低于B组,差异有统计学意义(P0.05)。结论1超声波结合艾灸以及单纯艾灸或超声波治疗均能延缓兔KOA软骨退变和减轻滑膜炎症。2超声波结合艾灸以及单纯艾灸或超声波在治疗兔KOA的效果上无明显差异,但两者结合可能对骨关节的不同组织作用有异于单纯超声波或单纯艾灸治疗。临床上在选择KOA中西医物理因子疗法治疗KOA时可能单纯选择超声波或艾灸中的一种方法即可,而无需多种理疗方法综合,可为今后进一步精准选择理疗方法治疗KOA提供一定参考依据,但今后仍需进一步研究。3超声波、艾灸可能是通过抑制软骨、滑液、滑膜VEGF、MMP-9、TIMP-1的表达来延缓软骨退变以及减轻滑膜、滑液炎症,从而起到治疗兔KOA的作用。
【图文】：

软骨,肉眼观察,股骨髁,表面形态

２各组组织形态学大体肉眼观察逡逑２．１各组软骨表面肉眼观察比较逡逑软骨表面形态肉眼观察比较（图３－１，表３－１）：超声波结合艾灸组：软骨表面稍不逡逑平整，色偏淡白，稍有光泽，透明度尚可，部分可见龟裂；艾灸组：软骨表面粗糙色白，逡逑光泽度稍低，，透明度差，软骨表面部分可见小溃疡；超声波组：软骨表面粗糙，稍透亮，逡逑颜色淡蓝偏白，部分可见裂隙；模型组：软骨表面暗淡粗糙，变薄，部分甚至糜烂；正逡逑常组：软骨呈乳白色，表面光滑透亮。逡逑，」ｗ逡逑超声波结合艾灸组逦艾灸组逦超声波组逡逑模型组逦正常组逡逑图３－１各组股骨髁软骨表面形态肉眼观察比较逡逑软骨表面形态肉眼观察评分结果比较（表３－１）：超声波结合艾灸组、艾灸组、超逡逑声波组、模型组软骨评分均高于正常组，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１，逡逑１５逡逑

形态学比较,软骨,光镜,艾灸

模型组逦正常组逡逑图３－２各组滑膜形态肉眼观察比较逡逑３各组组织染色及评分比较逡逑３．１各组软骨组织ＨＥ染色及其改良Ｍａｎｋｉｎ评分比较逡逑软骨组织ＨＥ染色光镜下观察结果比较（图３－３）：超声波结合艾灸组：软骨细胞逡逑较超声波组和艾灸组增多，排列较规整，偶见潮线不规则，少见失染现象；艾灸组：软逡逑骨细胞有较多增殖，且多余比模型组，排列较整齐，部分可见微小裂隙，潮线不齐或中逡逑断，轻染的现象；超声波组：软骨细胞稍微减少且排列稍紊乱，软骨表层不平整，部分逡逑可见小裂隙，潮线稍不齐或中断，失染的现象；模型组组：软骨表层部分可见纤维化，逡逑软骨细胞减少，细胞排列紊乱，有细胞簇聚，染色不均或失染，潮线中断或消失的现象逡逑发生；正常组：软骨细胞结构正常，基本无形变，潮线完整，各层均染无失染。逡逑■W■逡逑超声波结合艾灸组逦艾灸组逦超声波组逡逑：＾Ｉ逡逑模型组逦正常组逡逑图３－３各组软骨ＨＥ染色光镜下观察形态学比较（ｘ２０
【学位授予单位】：福建中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R684.3

【参考文献】