SLC3A2在乳腺癌中的表达及其对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为影响的研究

发布时间：2020-05-17 05:40

【摘要】：乳腺癌是女性最常见的肿瘤之一,同时也是女性癌症死亡的主要原因。其中肿瘤转移是患者致死的主要原因。因此,探索乳腺癌的发展,找到对乳腺癌的诊断及治疗相关的生物学标志物十分重要。溶质转运蛋白SLC3A2(也称为4F2hc/CD98hc),是大小约为85KDa的Ⅱ型跨膜糖蛋白,它可以通过激活整合素信号通路,影响肿瘤细胞的增殖、迁移和凋亡等,在肿瘤的发展过程中具有十分重要的作用。目的:1.观察SLC3A2在乳腺癌组织中的表达情况,探讨其表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系;2.观察SLC3A2的表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响,探索其对生物学行为影响可能存在的机制。方法:1.应用免疫组织化学技术(IHC)检测117例乳腺癌组织和68例乳腺良性疾病组织中SLC3A2的表达水平;2.应用QRT-PCR方法检测1株正常乳腺上皮细胞系和4株乳腺癌细胞系中SLC3A2 mRNA的表达情况;3.通过克隆技术构建SLC3A2的shRNA表达质粒建立稳转细胞系,以脂质体Lipofectamine2000转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,筛选并获得稳定SLC3A2低表达的细胞株,应用QRT-PCR和Western blot方法对细胞株进行验证;4.使用噻唑蓝比色法(MTT)和克隆形成实验检测下调SLC3A2表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖能力的影响;5.应用Transwell迁移实验检测下调SLC3A2表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力的影响;6.应用Transwell侵袭实验检测下调SLC3A2表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响;7.应用Western blot方法探索SLC3A2对乳腺癌生物学行为影响的机制。结果:1.SLC3A2定位于胞膜上,其在乳腺癌组织中的表达水平显著高于在乳腺良性疾病组织中(P0.05);2.乳腺癌中SLC3A2的阳性表达与肿瘤的淋巴结转移、TNM分期、Ki-67密切相关(P0.05),与患者年龄、肿瘤直径、组织学分级、ER、PR、HER-2、EGFR表达情况无关(P0.05);3.QRT-PCR结果显示:4株乳腺癌细胞系中SLC3A2 mRNA表达水平均高于乳腺正常上皮细胞系(P0.05);4.针对SLC3A2 mRNA不同序列区域,我们构建了4组shRNA(SLC3A2-shRNA1、SLC3A2-shRNA2、SLC3A2-shRNA3、SLC3A2-shRNA4)。分别转染4组shRNA及相应的空白载体。Western blot检测显示,与空白组和对照组相比,SLC3A2-shRNA1组、SLC3A2-shRNA2组SLC3A2的表达受到不同程度的抑制,成功获得稳定转染SLC3A2-shRNA1的MDA-MB-231细胞株进行下续实验;5.MTT实验和克隆形成实验结果表明下调SLC3A2表达后可以抑制乳腺癌细胞的增殖(P0.05);6.细胞迁移和侵袭实验结果显示下调SLC3A2表达后乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力受到抑制(P0.05);7.Western blot结果显示下调SLC3A2表达后MMP-2蛋白的表达下降。结论:SLC3A2在乳腺癌的发展过程中起促进作用,这一作用可能是通过MMP-2蛋白介导的,SLC3A2可能作为乳腺癌靶点治疗的指标。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.9

【参考文献】