高压氧对大鼠延迟皮瓣基底部瘢痕粘连和皮瓣血运影响的实验研究

发布时间：2020-05-24 06:08

【摘要】：目的本研究通过观察高压氧治疗后大鼠背部延迟皮瓣与基底部瘢痕组织的厚度、I/III型胶原比值,延迟皮瓣血管数量和血管管径、延迟皮瓣VEGF表达、延迟皮瓣血流量的变化,明确高压氧治疗对延迟皮瓣与基底部瘢痕粘连、延迟皮瓣血运重建时间的影响,寻求一种更安全且需时更短的延迟皮瓣形成方法,为临床延迟皮瓣法耳再造术进一步缩短手术间隔时间提供一种可能的方法。方法1、延迟皮瓣模型本实验采用SD大鼠背部模拟人耳再造的倒“C”形延迟皮瓣模型,蒂部为髂后上棘连线,以后正中线为中线向左右延伸,宽为3cm,皮瓣远端位于头侧,长6cm。手术沿切口线切开皮肤全层,用组织剪于肉膜层与肌膜层间分离掀起皮瓣,仅蒂部为延迟皮瓣提供血运。仔细止血后原位缝合,术后7日拆线。2、分组及处理健康雄性SD大鼠50只,随机分为2组:高压氧治疗组和对照组。每组分别再分成术前、术后1,7,14,21天5组,每个亚组含有5只动物。高压氧治疗组术后当天开始每天给予高压氧治疗2次,具体方法:动物置于动物实验舱内,10 min升压至0.2MPa,稳压36 min,氧浓度为(86±2)%,稳压期间每10 min通风换气2min,15 min减压出舱,2次之间间隔4 h以上,连续5天。对照组,术后不给予其他干预方式。3、标本的采集处理及观察指标3.1皮瓣血流量应用激光多普勒血流仪测量皮瓣血流量,每日观察术后21天组皮瓣血流量,记录术后两组皮瓣最大血流量出现的时间,并记录术前、术后第1、7、14、21天皮瓣的血流量。3.2皮瓣基底部炎症反应、瘢痕组织厚度及Ⅰ/Ⅲ型胶原比值取材方式:各组均于术前、术后第1、7、14、21天,使用腹腔注射5%戊巴比妥钠(10 mmg/kg体重)麻醉大鼠,在大鼠背部皮瓣距远端1.0-2.0 cm处切取0.5 cm×0.5 cm的皮瓣及基底组织样本浸泡于体积分数4%甲醛液中,固定后石蜡包埋,制成切片,苏木精-伊红染色后显微镜下观察。观察皮瓣基底部炎症反应及形态变化。测量术后21天的皮瓣基底部肉膜与肌膜间致密的瘢痕粘连组织厚度。在40倍光镜下随机测量5处瘢痕粘连组织厚度,取平均值作为该组的瘢痕粘连组织厚度。将包埋的切片行苦味酸天狼星红染色,切片在偏振光镜下亮色为I型胶原,绿色为III型胶原。每张组织切片在偏振光200倍镜下随机选择5个视野,切片拍摄照片后,用Image-Pro Plus 6.0专业图像分析软件内,使用灰度标记技术,比较两组间I/III型胶原比值。3.4皮瓣血管数、血管管径取材方式:各组均于术前、术后第1、7、14、21天,使用腹腔注射5%戊巴比妥钠(10 mg/kg体重)麻醉大鼠,在大鼠背部皮瓣距远端1.0-2.0 cm处切取0.5 cm×0.5 cm的皮瓣及基底组织样本浸泡于体积分数4%甲醛液中,固定后石蜡包埋,制成切片,苏木精-伊红染色后显微镜下观察。每组切片在40倍光镜下计算血管数,取该组平均值作为该组的血管数;40倍光镜下,随机选取3个血管,测量出每个血管口径的长轴和短轴的平均值,取3个数值的平均值作为该切片的平均血管口径管径,取平均值作为该组的管径。3.5皮瓣VEGF表达阳性细胞数两组大鼠于术前、术后第1、7、14、21天,使用腹腔注射5%戊巴比妥钠(10 mg/kg体重)麻醉大鼠,分别在距皮瓣远端1.0-2.0 cm处取约0.5 cm×0.5 cm大小的全层皮肤及皮下组织。用体积分数4%甲醛固定,以兔抗大鼠血管内皮生长因子单克隆抗体进行免疫组织化学染色,染色方法按照试剂盒说明书操作。最后以DAB显色,有棕黄色颗粒者的细胞为阳性染色。每组切片在400倍镜下随机选取3个视野,计录阳性数目,取平均值为该切片阳性细胞数。4.统计学分析数据用SPSS 20.0统计软件进行统计学处理,结果用X±s表示。采用成组t检验比较两组间差异,检验水准a=0.05。结果1.皮瓣血流量两组皮瓣血流量均在术后1天明显降低,之后血流量开始上升。高压氧治疗组在术后1、7、14、21天皮瓣血流量均高于对照组,两组间的差异有统计学意义(P0.05)。高压氧治疗组最大血流量出现在术后10±1.20天,对照组最大血流量出现在13± 1.40天,两组最大皮瓣血流量出现时间差异具有统计学差异(P0.05)。2.皮瓣基底部炎症反应、瘢痕组织厚度及I/III型胶原比值高压氧治疗组皮瓣术后皮下组织水肿较对照组轻,组织炎性细胞浸润较少。术后21天可见高压氧治疗组基底部成纤维细胞较少,排列较整齐,基底部组织密度较小、组织间粘连较轻。对照组基底部成纤维细胞较多,胶原致密,排列紊乱,旋涡状或结节状排列分布。术后21天基底部组织瘢痕粘连厚度高压氧治疗组小于对照组,两者的差异具有统计学意义(P0.05)。高压氧治疗组I/III型胶原比值较对照组降低(P0.05)。4.皮瓣血管数及血管管径术后1天皮瓣血管数两组差异不大(P0.05)。术后第7天、14天、21天,高压氧治疗组血管数高于普通组,差异有统计学意义(P0.05)。两组皮瓣血管管径均在术后1天最小,在术后14天时管径值最大。高压氧治疗组在术后1天开始血管管径大于对照组,两组间的差异有统计学意义(P0.05)。5.皮瓣VEGF表达两组皮瓣VEGF数均在术后1天即开始升高,在术后14天时到达最大值。高压氧治疗组在术后各个观察时间点VEGF数值均高于对照组,两组间的差异有统计学意义(P0.05)。结论1.高压氧能减轻大鼠延迟皮瓣与基底部的瘢痕粘连;2.高压氧能提高大鼠延迟皮瓣的血流量,其机制可能与促进血管生成有关。
【图文】：

宽度,皮瓣