【摘要】：目的:观察右美托咪定预处理对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护效果,进一步明确JNK通路及其介导的内质网应激性细胞凋亡在其中的作用。方法:60只体重为230-260g健康成年雄性大鼠,随机分为5组(n=12):对照组(N组),缺血再灌注组(I/R组),右美托咪定预处理+缺血再灌注组(D组),JNK抑制剂SP600125+缺血再灌注组(SP组),右美托咪定+SP600125+缺血再灌注组(D+SP组)。经腹腔注射戊巴比妥钠麻醉各实验大鼠后,快速开胸取出心脏。轻轻挤压心腔排除淤血,迅速将主动脉根部提起悬挂于Langendorff离体心脏灌注装置的灌注针尖端,左心耳剪口插入已预先调零的乳胶水囊并调节其大小为LVEDP在4-7mm Hg。每组分别给予不同的灌注方案,N组采用K-H液持续灌注205min;IR组:在K-H液平衡15min后,用K-H液继续灌注30min,之后停止灌注40min,再用K-H液继续灌注120min;D组:在K-H液平衡灌注15min后,用含有右美托咪定的K-H液继续灌注30min,之后处理同I/R组;SP组:在K-H液平衡灌注15min后,用含有SP600125的K-H液继续灌注30min,之后处理同I/R组;D+SP组:K-H液平衡灌注15min后,用含有右美托咪定以及SP600125的K-H液继续灌注30min,之后处理同I/R组。分别于平衡末(T1)、缺血前(T2)、再灌注末(T3)采集心功能指标:心率(HR)、左室内压最大上升/下降速率(±dp/dtmax)、左心室发展压(LVDP)、左心室舒张末压(LVEDP);留取再灌注末大鼠心肌组织:用ELISA法检测c Tn I浓度,用TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,电镜观察心肌超微结构,采用RT-PCR法检测GRP78、JNK基因的含量,采用Western blot检测GRP78、JNK、p-JNK蛋白的表达;对各组大鼠再灌注末心脏行TTC染色法检测心肌梗死面积。结果:(1)各组间心功能各项指标在平衡末(T1)、缺血前(T2)差异无统计学意义(P0.05);与T1时刻比较,各组大鼠再灌注末时刻(T3)的HR、±dp/dtmax、LVDP均明显降低,LVEDP均显著升高,(P0.05);在T3时点,与N组相比,I/R组、D组、SP组、D+SP组的HR、±dp/dtmax、LVDP均明显降低,LVEDP均显著升高,(P0.05);与I/R组相比,D组、SP组、D+SP组的HR、±dp/dtmax、LVDP均明显升高,LVEDP均显著降低,(P0.05);且D组、SP组、D+SP组之间各项心功能指标变化无统计学差异(P0.05)。(2)与N组比较,I/R组、D组、SP组、D+SP组的c Tn I相对浓度、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率显著增加,(P0.05);与I/R组相比,D组、SP组、D+SP组的c Tn I相对浓度、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率显著降低,(P0.05);D组、SP组、D+SP组的c Tn I相对浓度、心肌梗死面积均无明显变化,(P0.05);D组、D+SP组心肌细胞凋亡率无明显变化,(P0.05);但D组、D+SP组心肌细胞凋亡率小于SP组,(P0.05)。(3)电镜下观察N组心肌细胞超微结构完整;I/R组超微结构严重破坏,可明显见到凋亡小体;D组、SP组、D+SP组心肌细胞超微结构破坏较少,可偶见凋亡小体(4)与N组比较,I/R组GRP78基因以及蛋白的表达明显增加,(P0.05),JNK基因以及P-JNK蛋白的表达明显降低,(P0.05);与I/R组比较,其余各组GRP78基因以及蛋白表达明显降低,JNK基因以及P-JNK蛋白的表达明显降低,(P0.05)。结论:右美托咪定预处理可以有效减轻大鼠离体心肌缺血再灌注损伤,且这种保护作用可能与抑制内质网应激中的JNK信号通路过度活化,从而减轻心肌细胞凋亡有关。
【图文】：
之后处理同 I/R 组。图 1 各实验分组的不同灌注流程图1.2.3 数据采集与标本收集将每一个实验对象设定平衡灌注末时点为 T1、缺血前时点为 T2，再灌注末时点为 T3，分别于三个时刻（T1、T2、T3）采集并记录心功能指标。于再灌注末每组取6 只大鼠心脏做 TTC 染色并检测心肌梗死面积，，将另外的 6 只大鼠心脏分别于再灌末立即放入液氮罐冷冻固定 2 小时后置于-80℃冰箱保存，待后续采用 Tunel 法检测心肌细胞凋亡、采用 ELISA 法检测心肌组织超敏肌钙蛋白 I（cTnI）的表达、RT-PCR
20图 2 三种基因扩增曲线与溶解曲线（GAPDH-1、GRP78-1、JNK-1 分别代表相应基因的扩增曲线，GAPDH-2、GRP78-2、JNK-2 分别代表相应基因的溶解曲线）
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R614
【参考文献】
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2681541
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