同时转染表皮生长因子与血管内皮生长因子基因的脂肪干细胞促进皮肤损伤修复潜能的体外研究

发布时间：2020-05-30 07:05

【摘要】：目的通过研究同时转染表皮生长因子与血管内皮生长因子基因的脂肪干细胞表达相关因子的水平,及其对成纤维细胞增殖、迁移和血管内皮细胞成管能力的影响,探讨生长因子基因转染脂肪干细胞用于皮肤损伤修复的可行性。方法(一)取4周龄雄性SD大鼠,取双侧腹股沟区脂肪组织,利用酶消化法,提取大鼠脂肪干细胞,取P2代,流式细胞术检测细胞表面标志物CD73、CD90、CD45、CD11b,并诱导其向成骨细胞和成脂细胞方向分化。(二)构建带荧光慢病毒载体,将大鼠表皮生长因子与血管内皮生长因子基因同时转入脂肪干细胞,荧光显微镜下检测转染效率。(三)通过定量逆转录-聚合酶链式反应和酶联免疫吸附实验,检测基因转染后脂肪干细胞合成相关基因的水平和分泌相应生长因子的能力。(四)将基因转染脂肪干细胞的培养上清,用来培养成纤维细胞和血管内皮细胞,通过成纤维细胞增殖、成纤维细胞划痕、成纤维细胞Transwell迁移和血管内皮细胞成管等实验,检测其对成纤维细胞增殖、迁移和血管内皮细胞成管能力的影响。结果(一)分离培养的脂肪干细胞倒置显微镜下呈长梭形、集落状生长,流式细胞术测定细胞的相关表面分子表达率,显示CD73、CD90的表达呈阳性,CD45、CD11b的表达呈阴性,P4代脂肪干细胞经诱导向成骨细胞和成脂细胞方向分化后,分别用茜素红和油红O染色,均呈阳性;(二)慢病毒载体介导的表皮生长因子与血管内皮生长因子基因能有效转染脂肪干细胞;(三)同时转染表皮生长因子与血管内皮生长因子基因的脂肪干细胞能表达高水平的EGF、VEGF m RNA和蛋白;(四)同时转染表皮生长因子与血管内皮生长因子基因的脂肪干细胞培养上清能促进成纤维细胞增殖、成纤维细胞划痕愈合、成纤维细胞Transwell迁移和血管内皮细胞成管。结论(一)同时转染表皮生长因子与血管内皮生长因子基因的脂肪干细胞能表达高水平的EGF、VEGF m RNA和蛋白;(二)同时转染表皮生长因子与血管内皮生长因子基因的脂肪干细胞培养上清能在体外促进成纤维细胞增殖、迁移和血管内皮细胞成管的能力,因此具有促进皮肤损伤修复的潜能。
【图文】：

干细胞,贴壁细胞,集落,形态学

图 1A 原代 ADSC 第 3 天（40×）图 1B P3 代 ADSC（200×）图 1 脂肪干细胞形态学表现，1A 是原代 ADSC 第三天，可见细胞贴壁，呈长梭形；1B 是 P3 代 ADSC，可见贴壁细胞数量变多，生长呈集落样，细胞形态基本一致，似长梭形。

干细胞,贴壁细胞,集落,形态学

图 1A 原代 ADSC 第 3 天（40×）图 1B P3 代 ADSC（200×）图 1 脂肪干细胞形态学表现，1A 是原代 ADSC 第三天，可见细胞贴壁，，呈长梭形；1B 是 P3 代 ADSC，可见贴壁细胞数量变多，生长呈集落样，细胞形态基本一致，似长梭形。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R622

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