低氧诱导因子-1α对大鼠跨区皮瓣内血管内皮生长因子及其早期血管化的影响研究

发布时间：2020-06-05 16:47

【摘要】：目的:探讨体内诱导合成低氧诱导因子-1ɑ(hypoxia-inducible factor-1ɑ,HIF-1ɑ)对跨区皮瓣内VEGF(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响及其作用机制,为促进临床皮瓣远端早期血管化和提高其成活率提供新的理论思路。方法:选取健康成年雄性SD大鼠30只,体重在250-300g之间,并随机分成3组,实验组:激动剂处理组,抑制剂处理组;对照组:生理盐水组。术前2小时及术后1、2、3天分别对3组进行腹腔注射药物,激动剂组注射DMOG(二甲基乙二酰基甘氨酸),40mg/kg;抑制剂组注射YC-1[3-(5-羟甲基-2-呋喃基)-1-苯甲基吲唑],10mg/kg;对照组给予等体积生理盐水。在大鼠背部左侧建立一个以髂腰动脉为血管蒂,跨越肋间动脉和胸背动脉,肩胛下角为上边界,髂后上棘连线为下边界,后正中线为内侧边界,腋后线为外侧边界,长12cm,宽3cm的矩形跨区皮瓣模型。观察指标包括:(1)术后7天通过肉眼观察大体皮瓣的成活情况;(2)术后第7天通过M2 Image Analysis system图像分析系统对皮瓣成活率进行计算(皮瓣成活率=皮瓣成活面积/皮瓣总面积);(3)通过造影技术检测术后7天ChokeⅡ区血管生成情况;(4)通过HE染色法进行镜下血管数量检测;(5)通过Elisa法检测术后7天不同组间HIF-1ɑ、VEGF表达量。(6)通过Western blot检测术后7天不同组间HIF-1ɑ、VEGF表达量。(7)通过免疫组化检测术后7天不同组间HIF-1ɑ、VEGF的表达情况。结果1.大体观察:术后7天在3组皮瓣模型中,激动剂组皮瓣远端坏死范围明显小于对照组和抑制剂组。激动剂组内Choke II区出现血管扩张增生、贯通直达远端皮瓣组织,而对照组Choke II内血管未见明显变化,且远端皮瓣组织呈轻度暗黑色,抑制剂组内Choke II血管出现中断,远端皮瓣组织出现坏死。2.坏死面积:术后7天采用高清数码相机摄片,将图片数据通过M2 Image Analysis system图像分析系分别计算激动剂组、抑制剂组、对照组成活率(%)分别为90.38±1.36;84.28±1.45;85.83±1.59。与对照组相比,激动剂组高于对照组,有明显差异性(P0.05),具有统计学意义;而抑制剂组与对照组相比未见明显差异性,(P0.05),不具有统计学意义。3.造影:术后7天造影,激动剂组Choke vessels II区血管结构密集清晰,可出现大面积血管吻合网,而对照组和抑制剂组Choke vessels II区血管区血管结构则稀少模糊不清,血管吻合网较少。4.HE染色法进行镜下血管数量检测:在10×20倍光学显微镜镜下随意选取5个视野观测,根据实验结果发现激动剂组在术后第7天有明显的血管生长趋势和血管数量的增生;对照组术后第7天也出现新鲜血管生长趋势,但未见明显血管数量增生;抑制剂组术后血管生长较差,未有明显新血管增生。在Choke vessels II区中,平均血管数量为激动剂组24.00±5.52个;抑制剂组7.60±7.71个;对照组Choke vessels II区14.00±2.34个,激动剂组对照组抑制剂组。差异具有统计学意义(P0.05)。5.Elisa法检测术后7天choke II区choke II区的HIF-1ɑ表达量为激动剂组对照组抑制剂组(分别为2.87±0.19;1.85±0.41;0.89±0.29,单位为ng/mg);VEGF表达量为激动剂组对照组抑制剂组,(分别为34.87±3.05;19.64±1.13;14.41±1.34,单位为ng/mg)。与对照组相比二者均由明显差异性,具有统计学意义(P0.05)。6.Western blot检测HIF-1ɑ、VEGF:选取术后7天进行检测,Choke vessels II区HIF-1ɑ、VEGF的灰度值/β-actin的灰度值大小来表示HIF-1ɑ、VEGF蛋白表达强度,其结果为激动剂组对照组抑制剂组,两者与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。7.免疫组化检测内HIF-1ɑ、VEGF表达:在40×10倍电子显微镜下观察,发现现术后7天的激动剂组血管中HIF-1ɑ、VEGF表达明显,对照组、抑制剂组血管中也可见HIF-1ɑ、VEGF的表达,但两者表达量明显小于激动剂组。结论1.HIF-1α的表达可明显降低大鼠Choke vessles II区早期缺血的损伤程度。2.皮瓣移植术后,体内诱导HIF-1α的高表达可促进跨区皮瓣VEGF的表达,进而促进皮瓣Choke vessels II区的血管新生,进一步加快了早期血管化的进程,促进了皮瓣远端的血液供应,从而提高了大鼠背部跨区穿支皮瓣的成活。3.术后早期提高HIF-1α的表达有望成为促进跨区皮瓣成活的一种新途径。
【图文】：

皮瓣,高压蒸汽,缝合线,紫外线照射

缝合线原位缝合。术闭，用碘伏消毒液依次擦拭切口。为防止大鼠互咬皮瓣模型，术后均采用单笼饲养，，自由进食水。所用动物操作台术前均行紫外线照射，所用手术器械均高压蒸汽灭菌。（附：图1）2.3术后大体观察皮瓣的成活情况术后 7 天分别对三组皮瓣成活情况进行肉眼观察，观察指标主要包括：背部毛发生

皮瓣,激动剂,抑制剂,血管内皮生长因子

术后7天激动剂组(A)、抑制剂组(B)、对照组(C)皮瓣大体观
【学位授予单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R622

【参考文献】