人源性细胞外基质仿生补片修复腹股沟疝的研究

发布时间：2020-06-15 05:11

【摘要】：目的:腹股沟疝以手术治疗为主,无张力修补术中应用不可降解聚合物补片以增强腹股沟腹壁薄弱区,显著降低了传统腹股沟疝手术的复发率。但不可降解补片可致患者出现疼痛、补片感染和精索损伤等并发症。仿生生物补片是未来发展的趋势。理想的仿生腹股沟疝补片应该具有与腹膜类似的结构和成分,还应该具有相似的细胞外基质。在组织中,细胞外基质为细胞提供至关重要的机械支撑作用,并引导细胞的黏附和生长,同时调节其发展,稳态和再生。异种ECM含量丰富但有潜在种属间的抗原性,而同种细胞外基质无免疫原性,但临床上不易获得同种细胞外基质材料。乙肝病毒可以引起乙型肝炎及肝纤维化。乙肝病毒侵入肝脏激活肝星状细胞并转化为肌成纤维细胞样细胞,肝星状细胞的激活始终被认为是肝纤维化发生的中心环节。乙肝患者因人肝星状细胞(HSC)被病毒(HBV)持续激活而过量分泌胶原等ECM而发生肝硬化,研究证实HBV间接激活的HSC分泌胶原的能力比成纤维细胞更强。本研究将构建仿生人源性细胞外基质补片,用于无张力疝修补术以减少不可降解补片所致并发症。方法:我们静电纺丝获取聚己内酯(PCL)-明胶(Gelatin)纳米支架,检测其生物相容性、力学和孔隙率;再种植HBV激活的HSC,动态培养下HSC分泌胶原与PCL-Gelatin纳米纤维交联,检测ECM成分和性能以获得培养参数;脱细胞后构建人源性细胞外基质仿生补片,用于无张力疝修补术以减少不可降解补片所致并发症。制备腹沟股疝模型;将仿生补片体内移植、定期大体观察、取材检测。结果:仿生补片对精索的影响较小,并未形成粘连,在降解的过程中,可以承受腹腔内机械压力。目前制备的仿生补片相对于临床应用的不可降解补片,不仅可以完成修复疝和维持腹壁完整的功能,而且引起的炎症反应较小,同时逐渐降解直到最终完全被自身组织替换。因此,结论:本研究为复合补片形成自体组织提供了切实可行的理论和方案。目前已证实制备的补片可以在体内形成组织,为将来的临床应用奠定了基础。
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R656.21
【图文】：

肝星状细胞

具有较强的细胞扩增能力，以对数期生长，符合本研究的要求。但是激活ＨＳＣｓ逡逑的方式及主要因素，如ＨＢＶ感染或ＴＧＦ蛋白激活，哪一种是最有效的方式尚不逡逑能确定。如图２．邋１，我们用ＨｅｐＧ２．２．１５肝癌细胞共培养和ＴＧＦ－Ｐ浸润分别刺激逡逑肝星状细胞，为下一步将不同条件下的肝星状细胞种植于疝气补片产生细胞外基逡逑质做准备，探究最有效的人源性细胞外基质（ＥＣＭ）仿生补片生产途径。逡逑７１邋￣￣对照，未感染逦人源性肝星状细胞ＨＳＣ逡逑２逦ＨＢＶ间接感染ＨＳＣ邋ＨｅｐＧ２．邋２．邋１５细胞与ＨＳＣ细胞共培养逡逑３逦ＴＧＦ－（３邋刺激邋ＨＳＣ邋逦ＴＧＦ－（３邋１０ｎｇ／ｍｌ逦逡逑（２）邋ＨＢＶ＋ＨＳＣ：逦（３）邋ＴＧＦ－Ｐ＋ＨＳＣ：逡逑（０邋ＨＳＣ：逦ＨＢＶ邋ｉｎｆｅｃｔｅｄ邋ＨｅｐＧ２．２．邋１５逦Ａｄｄ邋ＴＧＦ￣ｐ邋ｔｏ逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ逦ｃｏ－ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＨＳＣ逦ＨＳＣ邋ｃｕｌｔｕｒｅ逡逑ａ＆ａ逦［Ｊｔ逡逑？ｉｎＵ？．邋Ｖｉｔ逦Ｌ逦Ｊ逦１邋邋？邋ｔ１邋；邋＼邋７逦ｃｕｌｔｕｒｅ逡逑＼逦／逦Ｈ？ｐ６２邋２．邋１５？｜ｆ邋Ｔ－逦．——一，一逦ｒ逡逑－；：：ｒＥ邋Ｈ逡逑ｆｔ逦Ｉ逦ＨＳＣ邋ｃｕｌｔｕｒｅ逦ＰＫＨ２６邋ｓｔａｉｎｉｎ＊逡逑ＨＳＣ邋ｃｕｌｔｕｒｅ逦ＨＢＶＭＳＳｌ染ＨＳＣ逦＇邋ｒ邋：邋ＰＫＨ２ａ．逡逑图２．１肝星状细胞的培养与处理逡逑Ｆｉｇ．２．１邋Ｔｈｅ邋ｃｕｌｔｕｒｅ邋ａｎｄ邋ｔｒｅａｔｍｅｎｔ邋ｏｆ邋ｈｅｐａｔｉｃ邋ｓｔｅｌｌａｔｅ邋ｃｅｌｌｓ．逡逑２．１肝星状细胞的培养逡逑肝星状细胞是合成ＥＣＭ的主要细胞

荧光染色,补片,共培养

在补片上生长，其中与ＨｅｐＧ２．邋２．邋１５共培养己获得ＨＢＶ刺激的ＨＳＣ增长率最高，逡逑其次为ＴＧＦ－Ｐ刺激的ＨＳＣｏＭＴＴ检测结果说明两种方法均能刺激ＨＳＣ的生长，逡逑而ＨＢＶ间接刺激的效果比ＴＧＦ－ｐ更明显（如图２．邋４）。逡逑ＭＴＴ邋ａｓｓａｙｓ逡逑＊０？逡逑ＨＳＣ逡逑逦－逦－逦逦逡逑／’逦ＨＳＣ邋＋邋ＨＢＶ逡逑？00邋■邋／逡逑Ｉ邋／／逦ＨＳＣＯＨ．逡逑｜邋＾邋，逡逑Ｓ邋？？逡逑你．—：一逦逡逑Ｔ？ｍ？＜ｄａｙ）逡逑Ｎ逦、逦＇逡逑２３逡逑

【参考文献】