NT-3基因转染的大鼠骨髓干细胞在树枝状两亲性肽凝胶中培养向神经元分化的研究

发布时间：2020-06-22 05:10

【摘要】：目的:研究将NT-3基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞接种于树枝状两亲性肽凝胶内部行三维培养,大鼠骨髓间充质干细胞向神经元分化情况。方法:取4-6周SD大鼠无菌下分离、培养骨髓间充质干细胞并鉴定。以巨细胞病毒作为启动子,构建1个携带NT-3基因的腺病毒载体即AdvNT-3,表达绿色荧光。以不同感染复数(MOI值)将AdvNT-3转染大鼠骨髓间充质干细胞,转染2天后观察绿色荧光蛋白表达情况确定最佳病毒感染复数。以AdvNT-3转染大鼠骨髓干细胞即为NT-3-BMSC。1 wt%多肽溶液和细胞悬液混合,细胞分布于凝胶内部形成三维培养体系。实验分三组,A组:BMSC二维培养组;B组:NT-3-BMSC二维培养组;C组:NT-3-BMSC+凝胶三维培养组;三组分别于体外培养7天后采用免疫荧光及qPCR检测神经元特异性标记物MAP-2、β-III Tubulin的表达情况。结果:分离培养的细胞通过流式细胞仪鉴定为骨髓干细胞。病毒转染骨髓间充质干细胞48h后荧光显微镜下观察有绿色荧光表达,且随着MOI值增大荧光表达越强烈,MOI=100时,荧光到达峰值,MOI为300时,显微镜下观察部分细胞死亡,因此最佳MOI为100。肽溶液在DMEM/F12触发下形成三维凝胶,肉眼观察呈透明凝胶状,在电镜下观察可见凝胶呈成三维网状纤维。免疫荧光结果显示:A组MAP-2、β-III Tubulin表达阴性,B组及C组MAP-2、β-III Tubulin均表达阳性,C组阳性率高于B组。qRCR的结果和免疫荧光的结果相同,B组、C组的神经元特异性标记物MAP-2、β-III Tubulin相对表达量均较A组升高,且C组的MAP-2、β-III Tubulin相对表达量均高于B组。因此经过NT-3基因改性BMSCs在三维凝胶中培养,能够促进细胞向神经元方向分化,且三维培养优于二维培养。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R651.2
【图文】：

12图 2 流式细胞仪检测第 3 代大鼠骨髓间充质干细胞表面抗原Figure 2: Detection of 3rd Generation BMSCs Surface Antigen by Flow Cytometry注：图中 A 所示为 CD29 阳性率 97.1%；B 为 CD44 阳性率 99.8%；C 为 CD34 阳性率 1.61 为 CD45 阳性率 1.71%。

图 3 大鼠骨髓间充质干细胞成骨、成脂诱导分化能力Figure3:Rat bone marrow stem cells osteogenic, adipogenic differentiation3.4 病毒转染最佳 MOI 值

【参考文献】

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2 周丽斌;徐冰心;丁瑞英;韩浩伦;王刚;李保卫;王鸿南;吴玮;;应用微纤维胶原支架构建组织工程软骨[J];中国组织工程研究;2017年22期

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5 陈睿;宋玉林;汪文玉;吴凯;陈伟高;;大鼠骨髓间充质干细胞与树枝状两亲性多肽自组装凝胶支架的生物相容性[J];西安交通大学学报(医学版);2016年06期

6 张琨;马珊珊;孟楠;邢衢;石振庆;关方霞;;海藻酸钠浓度对新型神经组织工程支架结构与性能的影响[J];郑州大学学报(理学版);2015年04期

7 宋玉林;;Angiogenesis Induced by IKVAV-Containing Amphiphile Peptide in vivo[J];Journal of Wuhan University of Technology(Materials Science Edition);2010年05期

8 宋玉林;黄华斌;郑启新;廖琦;;新型两亲性肽自组装凝胶与神经干细胞相容性研究[J];生物医学工程学杂志;2009年04期

9 宋玉林;;Two-dimensional Effects of Hydrogel Self-organized from IKVAV-containing Peptides on Growth and Differentiation of NSCs[J];Journal of Wuhan University of Technology(Materials Science Edition);2009年02期

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本文编号：2725241