新型预血管化的神经导管修复脊神经损伤的研究

发布时间：2020-07-08 13:33

【摘要】：目的:基于预血管化干细胞膜片,构建预血管化的神经导管,技术进行脊神经损伤修复的研究,为神经损伤提供更好的解决方法。方法:1)预血管化干细胞膜片基神经导管的构建:全骨髓贴壁法分离兔骨髓间充质干细胞(MSCs);运用MTT法测定细胞生长曲线;检测MSCs的多项分化潜能,包括成骨诱导分化,成脂诱导分化及成神经样细胞诱导分化;MSCs高密度连续培养5d后接种人脐静脉内皮细胞(HUVECs)然后再连续培养5d形成预血管化干细胞膜片;将预血管化干细胞膜片复合于管状支架上,培养l0d后将其取下,获得新型预血管化干细胞膜片导管;用HE染色、扫描电镜(SEM)及CD31、Collagen I和Fibronectin免疫荧光对预血管化干细胞膜片导管进行检测。2)新型预血管化干细胞膜片导管进行大鼠脊神经损伤的修复:大鼠脊髓损伤(SCI)模型的构建;将预血管化干细胞膜片导管植入大鼠脊髓损伤部位,单纯干细胞膜片组及空白组作为对照组;植入后每周进行BBB评分;于植入后第2、第8周处死动物,对标本进行耶染色、CD31、Tuj-1、GFAP免疫荧光染色。结果与结论:1)成功构建出新型预血管化干细胞膜片导管。分离出的干细胞具有成骨、成脂及成神经元样细胞分化的能力,其细胞预血管化的细胞膜片富含CD31,Collagen I以及Fibronectin。其表面粗糙,其上有微血管结构形成;2)将新型预血管化干细胞膜片导管修复大鼠脊神经损伤,可以得到较好的功能和组织修复效果。植入2W起预血管化干细胞膜片导管组的BBB份数明显高于空白组(P0.05),第4W起预血管化干细胞膜片导管组的BBB分数高于单纯干细胞膜片导管组(P0.05)。免疫荧光结果显示第2W,预血管化细胞膜片导管组Tuj-1的表达量略高于其余两组。第8W,预血管化细胞膜片导管组Tuj—1的表达量明显高于其余两组,空白组的GFAP的表达量高于其余两组。所以预血管化干细胞膜片导管对于脊髓损伤大鼠功能和组织学的修复有促进作用。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R651.2
【图文】：

细胞膜

竺＃丨、丨大学硕士研究生学位论文逦新型预血管化的神缓导管修复脊神经损伤的研究逡逑心脏：由于心肌细胞在出生不久之后便丧失了增殖能力，心肌细胞的再生便逡逑成为了一个很．重要的问题［４５］。用于心脏组织的细胞膜片都是多层细胞膜片，总体逡逑厚度较厚，此时细胞间的连接便显得十分重要［４１］。细胞膜片用于心脏细胞是很有逡逑用的，因为细胞膜片可议直接一层叠一层的粘附于宿主组织上ｒ每层组织之间还逡逑可以产生缝隙连接，这些在使用传统的支架时是不可能产生的［４４］。逡逑角膜；将细胞膜片应用于角膜的修复虫要有两个方面的优点，第一，细胞膜逡逑片具有一定的粘性，可直接粘附于角膜上，免于缝合第二，细胞膜片由于保逡逑存了细胞间连接以及ＥＣＭ，其脆性较小，可以直接进行操作，免子载体基板的逡逑v溆媒牛义鲜彻埽海茫樱诺氖褂每梢苑乐桂つは虑谐质鹾蟮氖彻芟琳纳苹颊叩纳铄义现柿俊Ｒ浦蚕赴箍梢酝ü置谙赴蜃蛹把仔砸蜃永创俳丝诘挠希跚醆逡逑者的炎症反应［４７］。逡逑逦邋Ｃｏｒｎｅａｌ逡逑

技术路线图,细胞膜,植入物,植入体

ｌ＿ｊｖｅｒ逦Ｐａｎｃｒｅａｓ逡逑图１邋－２细胞膜片的应用１＜１］逡逑Ｆｉｇｕｒｅｌ邋－２邋Ｔｈｅ邋ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ｃｅｌｌ邋ｓｈｅｅｔｓ？逡逑细胞膜片的血管化有着＿常重要的作用，没有组织的血管化植入物就无法在逡逑体内存活、生长。研宄表明植入体内的种子细胞只有在血管周围１５０？２００拜范逡逑Ｓ内才能通过营养物质的弥散得以成活［４１＇４８］。对于薄层的细胞膜片，植入后它可逡逑６逡逑

生长曲线,生长曲线,脂滴

２．２．３兔骨髓间充质于细胞的多向分化特征鉴定逡逑成骨诱导分化：成骨诱导２１ｄ后进行茜素红染色：可见细胞复层生长，有大逡逑片深红染色区域，为茜素红阳性区域色（图２－３邋ａｋ逡逑成脂诱导分化：成脂诱导２７（１后部分细胞胞浆内出＾｜圆形脂滴，有的为一大逡逑脂滴，有的为成串珠状排列的小脂滴。油红“０”染色呈阳性：细胞胞浆内可见逡逑许多大小不一的X/红色圆形脂滴（图２－３邋ｂ）。逡逑成神经样细胞诱导分化：诱导５ｈ后，有一半平细胞的胞体收缩成昼角形，逡逑细胞可伸出较多的长突起，细胞形状类似神经元样细胞，多个细胞的突起可相互逡逑延伸、连接。ＭＳＣｓ诱导５ｈ后，尼氏染色呈，阳性：细胞胞质中存在着深蓝色的逡逑颗粒状尼氏小体（图２－３邋ｃ）。逡逑ｉｗ：／灄，逡逑图２－３邋ＭＳＣｓ多向诱导分化ａ：成骨分化后茜素红染色；ｂ：成脂分化后油红０染色；ｃ：逡逑成神经样细胞分化后尼氏染色（Ｓｃａｎ邋ｂａｒ邋ｓｉｚｅ邋２００邋｜ｘｍ）逡逑１５逡逑

【参考文献】