Periostin蛋白过表达对小鼠损伤颈动脉再内皮化的影响

发布时间：2020-07-29 23:33

【摘要】：目的:血管腔内治疗技术以其微创的独特优势成为目前治疗动脉闭塞性疾病的主要治疗方式之一,然而腔内介入治疗术后血管再狭窄是一直不可回避的问题。本课题组拟采用核转染细胞过表达Periostin蛋白和体内细胞移植干预的方式对颈动脉损伤模型小鼠进行治疗并检测评估其效果,致力于寻找更好的腔内介入治疗术后血管再狭窄的治疗方案。方法:特制高脂饲料喂养ApoE-/-小鼠四个月,在饲养前后对小鼠进行称重和检测血脂水平,处死部分小鼠并进行颈总动脉和肝脏HE染色,观察组织结构的变化。外购稳定过表达Periostin蛋白内皮前体细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)细胞株并进行培养。将过表达Periostin蛋白的EPCs、沉默表达Periostin蛋白的EPCs、正常的EPCs分别经尾静脉注射进小鼠体内。治疗四个月后,通过Evans blue染色检测损伤颈动脉再内皮化情况;HE和红油O染色检测损伤动脉新生内膜增生情况并比较斑块面积大小;免疫组织化学染色法测定细胞核抗原Ki67和PCNA表达,间接检测细胞增殖程度。结果:高脂饮食组小鼠体重增加;血脂水平明显升高;病理染色提示颈总动脉内膜破坏增厚,大量斑块形成;肝脏结构紊乱,大部分肝细胞肿胀、气球样变,内有空泡形成。以上结果提示ApoE-/-小鼠颈动脉损伤模型建立成功。观察细胞的形态呈铺路石样;免疫组化鉴定细胞CD34表达为阳性;Western-blot实验检测Periostin蛋白在EPCs的稳定表达,可以用于后期颈动脉损伤模型小鼠的体内移植治疗。各病理染色结果表明过表达Periostin蛋白能够促进EPCs在小鼠体内增殖和损伤颈动脉再内皮化,效果明显。结论:本课题通过高脂饲料喂养ApoE-/-小鼠,能够成功建立颈动脉损伤模型小鼠。通过基因转染的方法构建过表达Periostin蛋白的EPCs,并进行体内移植治疗,研究结果表明过表达Periostin蛋白的EPCs能促进小鼠损伤颈动脉再内皮化,效果优于沉默表达Periostin蛋白的EPCs和单纯EPCs。
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R654
【图文】：

高密度脂蛋白胆固醇,低密度脂蛋白胆固醇,总胆固醇,静脉血

图 1-1 高脂饲养对小鼠体重的影响脂变化别在饲养前和每个月定期采集小鼠静脉血，检测总胆固醇（TCG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（H

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图 1-2 高脂饮食前、后对各组小鼠各项血脂水平影响注：图 A、B、C、D 分别为 HDL-C、LDL-C、TC、TG 指标随着时间变化而变化的水平。1.3.4 小鼠肝脏及颈动脉取材照片

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图 1-3 小鼠肝脏和颈总动脉及主动脉树取材注：图 A 和 B、C、D 分别为对照组和高脂饮食组小鼠肝脏和颈动脉取材过程片1.3.4 颈总动脉和肝脏染色分别在四个月后取高脂组和对照组小鼠颈总动脉和肝脏前叶，进行HE染色图 1-4 提示：对照组(A)小鼠颈动脉各层次结构完整、清晰，血管内膜薄、平滑无脂质沉积和血管平滑肌细胞增生。高脂饮食组（B）小鼠颈动脉内皮细胞被坏，内膜增厚、形成大量纤维斑块帽和粥样斑块。图 1-5 是对照组和高脂组小肝脏 HE 染色切片。图 1-5-A 显示对照组小鼠肝组织结构正常，肝细胞排列均匀规则，大小一致。细胞核呈圆形，形状规则；肝小叶未见炎症细胞和纤维组织生，结构正常。图 1-5-B 显示高脂组小鼠肝组织，肝小叶结构模糊，大部分肝胞形态不规则，并可见肝细胞发生气球样变、空泡变性，内有脂质淤积，有些胞发生坏死。

【参考文献】