胆囊切除术后综合征患者与术后无症状患者及健康人群肠道微生物组研究

发布时间：2020-08-17 14:34

【摘要】：[目的]分析胆囊切除术后综合征患者与健康人群及胆囊切除术后无症状患者肠道微生物主要菌落信息是否存在差异,探讨可能导致胆囊切除术后综合征的发病机制。[方法]1、采用 CTAB(HexadecyltrimethylammoniumBromide,十六烷基三甲基溴化铵)方法对8例胆囊切除术后综合征患者、8例健康人群及8例胆囊切除术后无症状患者新鲜粪便微生物的基因组DNA进行提取。2、选取细胞核糖体小亚基上的16SrRNA基因的高变异区域,使用带Barcode(条带技术)的特异引物,使用混合GC缓冲的高保真PCR(HFPCR,High-Fidelity PCR Master Mix with GC Buffer)和高保真酶和高效酶进行PCR扩增处理。3、对PCR扩增的回收产物使用建库试剂盒(TruSeq(?)DNA PCR-Free Sample Preparation Kit)进行基因文库构建,并使用高通量DNA测序技术(HiSeq2500,High-through Sequencing)进行上机测序。4、对测序所取得的基因数据结果进行OTU(Operational Taxonomic Units)聚类和微生物物种注释统计,依据OTU聚类和物种注释的结果进一步行样品复杂度分析和多样品比较分析。[结果]1、对24例粪便样品目标基因组DNA区域PCR扩增后的OUT数据聚类和物种注释结果进行综合统计,能用于构建OTUs并且获得注释信息的Tags数目均超过97%。2、肠道粪便微生物菌群中,相对丰富度处于前10位的菌群依次是:厚壁菌、拟杆菌、变形菌、疣微菌、放线菌、蓝藻菌、软壁菌、浮霉菌、酸杆菌、芽单胞菌。3、胆囊切除术后综合征患者组、健康人群组及胆囊切除术后无症状患者组中各组的不同样本间群落结构相似度较高。4、与健康人群组相比,胆囊切除术后综合征患者组的肠道微生物主要菌落疣微菌(Verrucomicrobia)、拟杆菌(Bacteroidetes)和厚壁杆菌(Firmicutes)的菌群丰度值差异性无统计学意义(P0.05);而变形菌(Proteobacteria)菌落信息差异性具有统计学意义(P=0.0100)。5、与胆囊切除术后无症状患者组相比,胆囊切除术后综合征患者组的肠道微生物主要菌落疣微菌(Verrucomicrobia)、拟杆菌(Bacteroidetes)、厚壁杆菌(Firmicutes)和变形菌(Proteobacteria)的菌群丰度值差异性无统计学意义(P0.05)。[结论]1、与胆囊切除术后无症状患者组相比,胆囊切除术后综合征患者组的肠道微生物主要菌落丰度值差异性无统计学意义。2、与健康人群相比,胆囊切除术后综合征患者肠道微生物变形菌(Proteobacteria)的含量较高。3、胆囊切除术后综合征患者粪便中变形菌丰度升高可能是导致胆囊切除术后综合征患者慢性腹泻、腹痛的致病因素。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R657.4
【图文】：

根据２４例研宄对象粪便中细菌微生物物种注释结果，选取２４个样品在门逡逑水平（Ｐｈｙｌｕｍ）上最大丰度排名的前１０物种注释数据，生成物种相对丰度柱形逡逑累加图。以２４例粪便样品的门水平物种相对丰度柱形图为例展示（图２），可直逡逑观查看２４例粪便样品基因序列在门水平上，明显对比出相对丰度较高的物种。逡逑在２４例样品粪便微生物菌群中，相对丰度值处于前１０位的菌群依次是：厚壁菌、逡逑拟杆菌、变形菌、疣微菌、放线菌、蓝藻菌、软壁菌、浮霉菌、酸杆菌、芽单逡逑胞菌。逡逑１５逡逑

在ＲＳ１组中含量较ＲＳ２、ＲＳ３组高（图３）。逡逑ｔｅｍａｒｙＰ＇0ｔ逦Ｆｉｒ．ｉｃｕ．ｅｓ逡逑拳邋Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ逡逑＃邋Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ逡逑／邋＼逦？邋Ｖｅｒｍｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ逡逑／逦＼逦？邋Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ逡逑／逦＼邋＾逦馨邋Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ逡逑■邋Ｔｅｎｅｒｉｃｕｔｅｓ逡逑／逦＼逦Ｐｌａｎｃｔｏｍｙｃｅｔｅｓ逡逑／逦＼邋？0逦？邋Ａｃｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ逡逑参：：７b0八逡逑ＲＳ１逦众逦分逦４逦ｃ，．逦ＲＳ２逡逑0邋0邋0邋0逡逑图３逦三组样本中以粪便微生物菌群门水平的三元相图逡逑注：ＲＳ１：胆囊切除术后综合征患者组；ＲＳ２：胆囊切除术后无症状患者组；逡逑ＲＳ３：健康人群组。Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ：厚壁菌、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ：拟杆菌、Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ：逡逑变形菌、Ｖｅｒｍｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ：抚微菌、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ：放线菌、Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ：逡逑蓝藻菌、Ｔｅｎｅｒｉｃｕｔｅｓ：软壁菌、Ｐｌａｎｃｔｏｍｙｃｅｔｅｓ：浮霉菌、Ａｃｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ：酸逡逑杆菌、Ｇｅｍｍａｔｉｍｏｎａｄｅｔｅｓ：芽单胞菌。逡逑图中三个顶点分别代表三个分组样本，一个圆饼代表一个物种门类，圆饼大逡逑小代表物种相对丰度，圆饼与各顶点的距离表示此物种在这个分组中的含量逡逑比例。逡逑５邋２４例研宄对象粪便微生物基因ＤＮＡ样品的ＰＣｏＡ分析逡逑主坐标分析（ＰＣｏＡ，Ｐｒｉｎｃｉｐａｌ邋Ｃｏ－ｏｒｄｉｎａｔｅｓ邋Ａｎａｌｙｓｉｓ）是通过一系列的特征逡逑１７逡逑

结果展示如图４，逡逑从图中可以看到：同一组间的各样本基本倾向于聚集在一起，而不同组间的样本逡逑相距较远。逡逑逦逦邋ＰＣｏＡ邋？邋ＰＣＩ邋ｖｓ邋ＰＣ２逦逦逡逑０邋３邋＇逦ＲＳ１－７逡逑■逡逑。．２邋．逦ＲＳ１，逡逑■逡逑ＲＳ１．８逡逑■逡逑Ｏ．１邋．逦ＲＳ，６逡逑ＲＳ１．１逦＊逡逑■逡逑？逦５邋Ｒｒ邋：ＥＲｒ邋Ｒｒ逡逑！。，－野８逦■逦－ＲＳ１逡逑－逦Ｒ？６逦？Ｓ２．５逦ＲＳ．２８逦ＡｒＩＩ逡逑ｓ逦？逡逑＂逦Ｒ＾４逦ＰＳ２．３逡逑－０．１－邋▲逡逑－０．２逡逑ＲＳ３．７逡逑？０．３邋？逦▲逡逑０１逦ＰＣ１°邋１９．５８％）逦０１逦0＇２逡逑图４基于Ｗｅｉｇｈｔｅｄ邋Ｕｎｉｆｒａｃ距离ＰＣｏＡ分析图逡逑注：ＲＳＩ：胆囊切除术后综合征患者组；ＲＳ２：胆囊切除术后无症状患者组；逡逑ＲＳ３：健康人群组逡逑６邋２４例研究对象粪便微生物基因ＤＮＡ样品的ＵＰＧＭＡ聚类树逡逑ＵＰＧＭＡ是一种较为常用的聚类分析方法。为了研究不同样品间的相似性，逡逑可以通过对样品进行聚类分析，构建样品的聚类树。对２４例研宄对象粪便微生逡逑物基因ＤＮＡ样品的聚类结果与各样品在门水平上的物种相对丰度整合展示（见图逡逑５）。从图５直观看出，与健康人群组相比，胆囊切除术后综合征患者组的肠道微逡逑生物菌落信息存在差异：变形菌（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）和抚微菌（Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ）逡逑丰富度升氋

【参考文献】

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本文编号：2795452