锶对脂肪干细胞成骨分化中VEGF表达及Notch信号通路相关蛋白表达的影响
发布时间：2020-08-28 02:54
【摘要】：目的:骨组织工程技术的发展为临床修复骨缺损提供了新的途径。脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)以其易获取,增殖快,具有多向分化潜能等优点逐渐受到学者们的关注。然而,临床上运用组织工程骨修复骨缺损的效果并不理想。研究表明因血供不足而产生的局部骨坏死是导致其修复效果不理想的原因之一。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)不仅是调节内皮细胞增殖及血管形成的重要生长因子,还影响着骨的生长发育及修复。研究表明锶(strontium,Sr)可以提高ADSCs成骨分化过程中VEGF的表达量,促进骨缺损修复过程中的血管形成。本研究对VEGF在锶促ADSCs成骨分化过程中的表达进行了更加深入的研究,运用氯化锶、Notch信号通路阻断剂γ-分泌酶抑制剂(DAPT)及二者共同处理成骨诱导的ADSCs,并设立对照组,通过比较各组间Notch信号通路相关蛋白(Notch intracellular domain,NICD)及VEGF蛋白表达量的变化情况,探究锶促ADSCs成骨分化过程中VEGF表达升高是否与Notch信号通路相关。研究方法:1、提取ADSCs,进行体外培养及鉴定。2、将传至P3的ADSCs于成骨诱导培养基中进行成骨分化培养。3、分别用氯化锶、Notch信号通路抑制剂DAPT及氯化锶和DAPT共同干预预处理的ADSCs,并设置对照组,6d后提取各组细胞总蛋白。4、运用Western Blot方法检测各组别预处理的ADSCs中Notch信号通路蛋白NICD及VEGF的蛋白表达量。结果:1、与CONTROL组的NICD(0.6715±0.0505)相比,Sr组的NICD(1.1877±0.0892)蛋白表达显著提高(P0.01),DAPT组的NICD(0.3483±0.0262)蛋白表达显著降低(P0.01);与Sr组相比,Sr+DAPT组的NICD(0.3867±0.0291)蛋白表达显著降低(P0.001)。2、与CONTROL组的VEGF(0.6889±0.0394)相比,Sr组的VEGF(1.3200±0.0755)蛋白表达显著升高(P0.001),DAPT组的VEGF(0.4656±0.0266)蛋白表达显著降低(P0.01);与Sr组相比,Sr+DAPT组的VEGF(1.0575±0.0605)蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:锶能上调ADSCs成骨分化过程中VEGF的表达。在锶促ADSCs成骨分化过程中,Notch信号通路被激活,并对VEGF的表达起正向调控作用。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R622
【图文】：
中国医科大学硕士学位论文3 实验结果s 形态学观察DSCs 分离提取接种后 24h，于倒置相差显微镜下观察可壁，形态呈圆形。48h 观察可见 ADSCs 基本贴壁，形态形，72h 观察可见 ADSCs 分裂增殖呈长梭形并成簇生长s 长满培养瓶底部，呈集落样生长，方向性明显（图 1A）90％，进行传代培养，传代后的 ADSCs 分裂增殖速度加0％，生长状态良好，细胞形态均一，呈明显方向性（图
中国医科大学硕士学位论文SCs 鉴定结果SCs 成脂化诱导后，细胞体积逐渐变大，胞体逐渐变圆，胞浆并逐渐增多，14d 油红 O 染色倒置相差显微镜下观察结果显示脂滴被染成红色，证明 ADSCs 具有成脂向分化潜能（图 2A）导后，细胞体积逐渐增大，胞体由长梭形变成椭圆形和多角形现钙结晶，20d 茜素红染色倒置显微镜下观察结果显示细胞外成红色，证明 ADSCs 是具有成骨向分化潜能（图 2B）。流式示所培养的细胞 CD13，CD29 呈阳性表达，CD34 呈阴性表表型，表明所分离培养的细胞为 ADSCs（由于实验采用同一批果引用同组人员实验结果）。
.3 Western Blot 法检测 Notch 信号通路因子（NICD）及 VEGF 蛋达结果本研究所得到的结果数据是通过对同一组样本进行重复 3 次平行实验所，以β-actin 为内参对样本数据进行统计学分析。各组 Notch 信号通路因NICD）及 VEGF 蛋白表达结果（图 3）。与 CONTROL 组 的 NICD （ 0.6715±0.0505 ） 相 比 ， Sr 组 的 NIC1.1877±0.0892）蛋白表达显著提高（P＜0.01)，DAPT组的NICD（0.3483±0.026白表达显著降低(P＜0.01）；与Sr组相比，Sr＋DAPT组的NICD（0.3867±0.029白表达显著降低（P<0.001）。与 CONTROL 组的 VEGF（0.6889±0.0394），Sr 组的 VEGF（1.3200±0.0755）蛋白表达显著升高（P＜0.001)，DAPT 组EGF（0.4656±0.0266）蛋白表达显著降低(P＜0.01）；与 Sr 组相比，Sr＋DA的 VEGF（1.0575±0.0605）蛋白表达显著降低（P＜0.01）（图 4）。
本文编号：2806991
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R622
【图文】：
中国医科大学硕士学位论文3 实验结果s 形态学观察DSCs 分离提取接种后 24h，于倒置相差显微镜下观察可壁，形态呈圆形。48h 观察可见 ADSCs 基本贴壁，形态形，72h 观察可见 ADSCs 分裂增殖呈长梭形并成簇生长s 长满培养瓶底部，呈集落样生长，方向性明显（图 1A）90％，进行传代培养，传代后的 ADSCs 分裂增殖速度加0％，生长状态良好，细胞形态均一，呈明显方向性（图
中国医科大学硕士学位论文SCs 鉴定结果SCs 成脂化诱导后，细胞体积逐渐变大，胞体逐渐变圆，胞浆并逐渐增多，14d 油红 O 染色倒置相差显微镜下观察结果显示脂滴被染成红色，证明 ADSCs 具有成脂向分化潜能（图 2A）导后，细胞体积逐渐增大，胞体由长梭形变成椭圆形和多角形现钙结晶，20d 茜素红染色倒置显微镜下观察结果显示细胞外成红色，证明 ADSCs 是具有成骨向分化潜能（图 2B）。流式示所培养的细胞 CD13，CD29 呈阳性表达，CD34 呈阴性表表型，表明所分离培养的细胞为 ADSCs（由于实验采用同一批果引用同组人员实验结果）。
.3 Western Blot 法检测 Notch 信号通路因子（NICD）及 VEGF 蛋达结果本研究所得到的结果数据是通过对同一组样本进行重复 3 次平行实验所，以β-actin 为内参对样本数据进行统计学分析。各组 Notch 信号通路因NICD）及 VEGF 蛋白表达结果（图 3）。与 CONTROL 组 的 NICD （ 0.6715±0.0505 ） 相 比 ， Sr 组 的 NIC1.1877±0.0892）蛋白表达显著提高（P＜0.01)，DAPT组的NICD（0.3483±0.026白表达显著降低(P＜0.01）；与Sr组相比，Sr＋DAPT组的NICD（0.3867±0.029白表达显著降低（P<0.001）。与 CONTROL 组的 VEGF（0.6889±0.0394），Sr 组的 VEGF（1.3200±0.0755）蛋白表达显著升高（P＜0.001)，DAPT 组EGF（0.4656±0.0266）蛋白表达显著降低(P＜0.01）；与 Sr 组相比，Sr＋DA的 VEGF（1.0575±0.0605）蛋白表达显著降低（P＜0.01）（图 4）。
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 Han-Tsung Liao;Chien-Tzung Chen;;Osteogenic potential: comparison between bone marrow and adipose-derived mesenchymal stem cells[J];World Journal of Stem Cells;2014年03期
本文编号：2806991
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/waikelunwen/2806991.html
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