大鼠肺泡上皮细胞紧密连接蛋白claudin 1、3、4与肺爆震伤致肺水肿的关系研究

发布时间：2020-09-04 16:48

　　目的:探讨大鼠肺泡上皮细胞紧密连接蛋白claudin 1、3、4与肺爆震伤致肺水肿的关系。方法:将10只SD大鼠随机等分成两组:实验组和对照组,实验组应用PVC(Polyvinylchlorid,聚氯乙烯)管和爆竹建立大鼠肺爆震伤模型。各组大鼠均于4小时后处死,打开胸腔,留取肺组织用于HE染色、免疫组化染色和肺泡上皮细胞基膜染色。制备肺组织胶体镧电镜标本,用于观察肺泡上皮形态及镧颗粒的分布。制备支气管肺泡灌洗液,应用紫外分光光度法测定蛋白含量。免疫组化染色结果通过图像分析软件测出claudin 1、3、4含量的平均灰度代表蛋白含量。培养L2细胞,随机等分成实验组和对照组(n=6),实验组细胞经高压气体作用,干预后2小时测claudin蛋白含量和单层细胞通透性。设计、筛选高效的si RNA,将培养好的L2细胞随机等分成claudin1、3、4组,每组在随机等分成实验组和对照组,实验组用相应的si RNA分别干扰claudin1、3、4蛋白的表达,干预后6小时测定相应claudin蛋白含量、单层细胞通透性,并做免疫荧光实验。结果:实验组各大鼠在爆炸发生后均表现出不同程度呼吸加快及口鼻周围出现粉红色渗出液。实验组肺脏弥漫性肿大,色泽暗红,表面可见大小不一的出血点,对照组未见明显异常。光镜下见实验组肺泡腔内弥漫性炎细胞浸润,大量红细胞及液体漏出,肺泡上皮细胞基膜断裂,细胞间隔增宽,对照未见明显异常。电镜下见实验组肺泡间隔内有大量镧颗粒聚集,对照组仅有少量镧颗粒进入肺泡间隔。实验组claudin 1、3、4含量下降,肺水含量增加,蛋白漏出明显相比于对照组。高压气体作用后实验组伊文思蓝清楚率增加,claudin3、4含量降低,claudin1含量与对照组比较差异无统计学意义。si RNA干扰后,claudin3、4实验组伊文思蓝清除率增加,claudin1实验组伊文思蓝清除率与对照组比较差异无统计学意义。实验组蛋白含量较相应对照组蛋白含量低。免疫荧光染色显示各目标蛋白均仅表达于细胞膜上。结论:BLI发生后紧密连接蛋白含量下降,claudin 1、3、4的含量与BLI程度呈负相关,且claudin3、4在紧密连接功能变化中起到关键作用,蛋白含量变化导致上皮通透性改变,BLI后紧密连接蛋白含量与肺水肿的发生、发展紧密相关。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：R655
【部分图文】：

肺组织,干重,支气管肺泡灌洗液,对照组

图 2-1。表 1-1 肺组织 W/D、BALF 中蛋白含量的变化(n=5， x ±s)分组湿/干重比支气管肺泡灌洗液蛋白含量(ug/mL)对照组 2.42±0.39 43.37±6.79实验组 4.83±0.51* 197.58±11.08*注：*与对照组比较 p㩳0.05

肺泡,结构完整,红细胞,肺组织

对照组：肺泡结构完整，未见明显病理改变。BLI 组：肺泡腔内可见中性粒细聚集，有的肺泡腔可见明显的红细胞漏出，有的肺泡腔可见液体漏出(见图 2-3)；泡上皮细胞基膜断裂，上皮细胞间隔增宽(见图 2-4)。

肺泡,基膜,结构完整,肺泡上皮

肺泡上皮基膜染色注：蓝色---肺泡上皮基膜、毛细血管基膜，红色---细胞核，淡红色---细胞质；左侧为对照组，基膜结构完整；

【参考文献】