Sigma-1受体和proNGF在IL-6诱导的乳鼠心肌细胞损伤中变化的研究

发布时间：2020-09-17 17:02

　　 目的:探讨Sigma-1受体和pro NGF等在IL-6或缺氧复氧诱导乳鼠心肌损伤下的变化及与凋亡的关系。方法:1.建立IL-6诱导的乳鼠心肌细胞损伤模型。具体方法为:分离SPF级新生SD大鼠乳鼠心肌细胞,培养48h后行细胞计数并随机分为正常组(Nor组)、IL-6(400μg/L)组、IL-6(800μg/L)组、IL-6(1200μg/L)组。其中Nor组于37°C培养箱中常氧持续培养24h,余各组加入上述不同浓度IL-6后按Nor组培养24h,于24h末利用流式细胞仪测定各组乳鼠心肌细胞凋亡率,以凋亡率达50%左右组别的浓度作为后续实验IL-6诱导细胞损伤干预浓度。2.分离SPF级新生SD大鼠乳鼠心肌细胞,培养48h后行细胞计数并随机分为正常组(Nor组)、IL-6组、缺氧/复氧组(H/R组)、IL-6+H/R组,其中Nor组37℃培养箱中持续培养24h;IL-6组在培养基中加入浓度为800μg/L的IL-6后培养同Nor组;H/R组先缺氧8h,再复氧16h处理;IL-6+H/R组则在培养基中加入IL-6后余处理同H/R组。各组于24h末通过流式细胞仪测定乳鼠心肌细胞凋亡率,通过Real-time-PCR检测pro NGF、p75NTR、sortilin及Sigma-1受体的表达,并用western blot检测pro NGF蛋白的表达。结果:1.各组诱发乳鼠心肌细胞凋亡情况:与Nor组相比,IL-6组、H/R组、IL-6+H/R组心肌细胞凋亡率均明显上升(P(27)0.05),其中IL-6+H/R组凋亡率较IL-6组及H/R组升高明显(P(27)0.05),而IL-6组凋亡率高于H/R组(P(27)0.05)。2.IL-6和H/R处理后乳鼠心肌细胞pro NGF、p75NTR、sortilin及Sigma-1受体m RNA水平的改变:IL-6组、H/R组、IL-6+H/R组与Nor组相比,pro NGF、p75NTR、sortilin、Sigma-1受体m RNA表达增多(P0.05),同时结果显示,IL-6组pro NGF、p75NTR、Sigma-1受体m RNA表达较IL-6+H/R组低但高于H/R组(P0.05),而sortilin m RNA在IL-6组、H/R组、IL-6+H/R各组间差异均无意义(P0.05)。3.IL-6和H/R处理后乳鼠心肌细胞pro NGF蛋白的表达量变化:H/R组心肌细胞pro NGF蛋白表达量较Nor组、IL-6组及IL-6+H/R组高,差异有统计学意义(P(27)0.05);Nor组与IL-6组、IL-6+H/R组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论:1.IL-6或H/R可上调pro NGF、p75NTR、sortilin及sigma-1受体m RNA基因的表达,且H/R可上调pro NGF蛋白的表达,但IL-6无此效应;2.IL-6或H/R均可诱导乳鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与sigma-1受体、p75NTR及sortilin m RNA基因表达上调有关;3.pro NGF参与H/R诱导的乳鼠心肌细胞凋亡,而IL-6诱导的乳鼠心肌细胞凋亡与此可能无关;4.IL-6、H/R诱导乳鼠心肌细胞凋亡二者具有加和效应。
【学位单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R614
【部分图文】：

学院硕士学位论文 郑果SD 大鼠乳鼠原代心肌细胞分离培养结果置显微镜下可见所培养的乳鼠心肌细胞为梭形或多角形、单个或集落样伸壁生长。细胞内致密，折光率高，胞质因含有颗粒样物质而显得粗糙；胞核圆形且颜色稍深，内含核仁 1~2 个，培养 48 小时后细胞单层融合并可见自培养 72 小时可见伸出的伪足相互交织成网，形成簇状且同步搏动的细胞团

图 2 不同浓度 IL-6 诱导乳鼠心肌细胞凋亡散点图ig 2 Scatter plot of cardiomyocyte apoptosis induced by different concentrations of IL-6neonate rats表 1 不同浓度 IL-6 作用时乳鼠心肌细胞凋亡率的变化(n＝3， x 士 s)Tab 1 Changes of cardiomyocyte apoptosis rate in neonate rats treated with differentconcentrations of IL-6 (n＝3， x 士 s)与 Nor 组相比，aP＜0.05；与400 μg/L组相比，bP＜0.05；与 800 μg/L组相比，cP＜0IL-6 浓度 细胞凋亡率（％）Nor 组 －400 μg/L3.36 0.40400 μg/L 组 8.14 0.65a800 μg/L 组 800 μg/L 46.03 4.26ab1200 μg/L 组 1200 μg/L 74.23 1.12abc

图 3 不同浓度 IL-6 作用乳鼠心肌细胞凋亡率柱状图 3 Bar chart of cardiomyocyte apoptosis rate in neonate rats treated with differentconcentrations of IL-6注：*P<0.05，n＝3诱导乳鼠心肌细胞凋亡情况or组相比，IL-6组、H/R组、IL-6+H/R组心肌细胞凋亡率均明显上升（P 0+H/R 组凋亡率较 IL-6 组及 H/R 组升高明显（P 0.05），而 IL-6 组凋亡 组（P 0.05）（图 4、图 5、表 2）。

【参考文献】

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1 Tonglin Lu;Zhiping Hu;Liuwang Zeng;Zheng Jiang;;Changes in secretory pathway Ca~(2+)-ATPase 2 following focal cerebral ischemia/reperfusion injury[J];Neural Regeneration Research;2013年01期

本文编号：2820980