薰衣草油对昆明小鼠深Ⅱ度烫伤创面和瘢痕的治疗作用

发布时间：2020-10-30 07:09

　　 目的选用昆明小鼠制备皮肤深Ⅱ度烫伤模型。探讨薰衣草油对深Ⅱ度烫伤皮肤的治疗作用。检测小鼠治疗前后烫伤创面愈合和瘢痕形成情况,初步探讨其作用机制。方法选取32只昆明小鼠,随机分为四组,空白组6只、模型组6只、对照组10只,实验组10只。空白组不进行模型建造,模型组、对照组、实验组三组建立烫伤模型后分别外涂生理盐水、多磺酸粘多糖乳膏和薰衣草油进行治疗,两次/日,疗程28天。空白组、模型组、对照组和实验组均使用腹腔注射10%水合氯醛(400mg/kg)对小鼠进行麻醉;麻醉后,8%硫化钠溶液脱毛上背部的,面积为2cm X 4cm;于脱毛完毕恢复24h,将模型组、对照组、实验组的小鼠脱毛区域局部外用70%乙醇进行消毒;将水浴箱加热,待水温升至95℃并设置恒温,将小鼠脱毛区域置于恒温箱蒸汽口上端10cm处,于10s后移开,烫伤面积约等于脱毛面积,均通过蒸汽烫伤法建立深Ⅱ度烫伤模型。予0.9%氯化钠注射液2ml腹腔注射,以抗休克。成功建立模型后,对模型组、对照组和实验组的小鼠分笼饲养,并分别外涂生理盐水、多磺酸粘多糖乳膏(喜疗妥)和薰衣草油进行治疗,两次/日,疗程28天。治疗开始后,每日观察以及文字记录创面愈合和瘢痕形成情况,并拍照存档。各组小鼠于第7天实施鼠尾取血,第28天实施眼球取血,将各组别血液离心后取出血清部分;第7天和第28天剪下各组别小鼠部分瘢痕组织,离心后取出上清液。将以上收集的标本分别装入无菌离心管,标记后存入-80℃冰箱冷藏。待所有标本取齐后,从冰箱取出血清和组织上清液标本,于室温(25℃)解冻,行ELISA检测标本中TGF-β1、Ⅰ型前胶原、Ⅲ型前胶原、IL-10的含量变化。于治疗第28天,剪下部分瘢痕组织并用10%中性甲醛固定后做好标记,制作病理切片,行脱水,HE染色。切片扫描。观察创面及瘢痕形成情况的组织学形态改变,测量并记录各组标本组织的表皮及瘢痕厚度。以400μm为单位,计算单位面积毛囊个数,计数10个视野取平均值,评估毛囊生存情况。采用统计软件SPSS 16.0行数据分析,计算数据以均数±标准差表示,组间比较采用t检验和单因素方差分析。当方差齐性时,多组间均数比较采用方差分析LSD;当方差不齐时,采用KW。采用LSD方法对表皮厚度、瘢痕厚度两指标进行组间比较分析;采用KW H检验对毛囊指标进行组间比较描述,指标描述采用M(P25-P75)描述。均以P0.05表示差异有统计学意义。结果1.建立深Ⅱ度烫伤模型1.1模型组、对照组、实验组的小鼠均出现深Ⅱ度烫伤的皮肤创面体征及病理组织学表现。1.2空白组TGF-β1、IL-10、Ⅰ/Ⅲ型前胶原比值分别为64.3±9.25ng/ml、48.48±3.70ng/ml、1.35±0.04。2.各组别病程发展2.1模型组:创面肉眼观察颜色紫红,形状不规则,触之较硬且表面不平整。创面炎症相对重,愈合慢。表皮、瘢痕及毛囊剧烈增生,表皮厚度为78.3±36.0μm、瘢痕厚度1129.2±495.1μm、单位面积内毛囊数量3.5个。建立模型后第7天的TGF-β1、IL-10、Ⅰ/Ⅲ型前胶原比值分别为129.19±10.29ng/ml、58.54±4.17ng/ml、4.02±0.24;第28天分别为249.80±7.35ng/ml、67.25±2.83ng/ml、7.31±0.47,各标本值均随着病程进展逐渐升高,且明显高于正常(P0.05)。2.2对照组:创面肉眼观察颜色粉红,形状较规则,触之质软且表面较为平整。创面处炎症相对轻微,愈合相对快,毛囊、表皮及瘢痕厚度增生较轻,表皮厚度为74.4±20.6μm、瘢痕厚度970.6±301.7μm、单位面积内毛囊数量3个。建立模型后第7天TGF-β1、IL-10、Ⅰ/Ⅲ型前胶原比值分别为265.58±9.95ng/ml、73.64±8.10ng/ml、3.64±0.33;第28天分别为116.40±19.78ng/ml、59.70±3.59ng/ml、2.29±0.29,各标本值均在治疗第7天显著升高,于治疗第28天大幅度下降,略高于正常(P0.05)。2.3实验组:创面肉眼观察呈鲜红色,形状较规则,触之质软且表面平整。创面炎症轻,愈合快;表皮、毛囊及瘢痕厚度增生相对弱(P0.05),表皮厚度为54.3±13.3μm、瘢痕厚度424.5±119.5μm、单位面积内毛囊数量1个。建立模型后第7天的TGF-β1、IL-10、Ⅰ/Ⅲ型前胶原比值分别为303.57±8.03ng/ml、88.08±3.90ng/ml、3.20±0.27;第28天分别为69.45±11.31ng/ml、50.06±6.16ng/ml、1.79±0.51,各标本值均在治疗第7天剧烈升高,于治疗第28天基本降至正常(P0.05)。结论1.昆明小鼠可以制备皮肤深Ⅱ度烫伤模型,且能模拟人体皮肤烫伤在组织学及分子生物学上的特征性改变。2.烫伤小鼠体内血清TGF-β1,IL-10,组织Ⅰ,Ⅲ型前胶原各指标表达与创面愈合呈正相关。薰衣草油通过改善机体血清TGF-β1,IL-10表达,调节组织内Ⅰ/Ⅲ型前胶原的表达,显著促进昆明小鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合及抑制瘢痕形成。
【学位单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R644
【部分图文】：

图 1 创面皮损形态学变化1：实验组，2：对照组，3:模型组（a：治疗后 3 天，b：治疗后 7 天；c：治疗后 28 天）组别组织病理学改变 结果见图 2 和图 3(HE 染色切片于 40X 镜下白组：正常皮肤，表皮层薄，毛囊稀疏，真皮胶原稀疏。验组：治疗后的表皮轻度增生，真皮胶原纤维增生显著弱于对不显著，毛囊增生，但较模型组有显著改善，上皮细胞分化相晰，炎症细胞浸润显著轻于模型组，可见新生肉芽组织。照组：治疗后的表皮及真皮层细胞出现较模型组轻的变性、坏模型组完整，真皮胶原纤维增生，瘢痕增生剧烈，毛囊增生，善，炎症细胞浸润较模型组轻，有少许分泌物。型组：建立模型后瘢痕增生剧烈的，表皮结构不清晰，表皮与毛层受损，真皮处胶原纤维增生，胶原纤维化且大量成纤维细胞分布紊乱。表皮及真皮层大量细胞变性、坏死，炎症细胞浸润皮肤附属结构如毛囊结构破损。

图 3 各组别组织病理学改变（100X）（a：实验组，b：对照组，c：模型组，d：空白组）LISA 检测 TGF-β1、IL-10 、Ⅰ型前胶原/Ⅲ型前胶原比值的变化组别 TGF-β1 含量的变化 结果见表 1创面愈合整个过程中，各组别血清 TGF-β1 均处在动态变化中，空GF-β1 的均数为 64.3±9.25ng/ml(n=6)。疗第 7 天，模型组血清 TGF-β1 的均数为 129.19±10.29ng/ml(n=6)，型组含量与空白组有明显差异。治疗前 7 天，模型组小鼠血清中 逐 渐 升 高 ； 治 疗 第 7 天 ， 对 照 组 血 清 TGF-β1 的 均±9.95ng/ml(n=10)，P﹤0.05 表示对照组含量与模型组有明显差异，血清 TGF-β1 含量；于治疗第 7 天检测实验组血清 TGF-β1 的±8.03ng/ml(n=10)，P﹤0.05 表示实验组含量与对照组有明显差异，著提高血清 TGF-β1 含量。疗第 28 天，实验组血清 TGF-β1 的均数为 69.45±11.31ng/ml，基本平 ； 对 照 组 为 116.40±19.78ng/ml ， 稍 高 于 正 常 水 平 ； 模 型

度烫伤创面和瘢痕的他三组与实验组组间比较，均有 P<0.05，表示有统计学意义。述结果比较显示，在治疗末期各组实验动物的皮肤表皮厚度已意义的变化；从均数上看，使用薰衣草油的实验组皮肤表皮厚。表 4 各组别表皮厚度变化情况（μm）别 n x sF 组 6 26.3±10.9#&※8.2 <组 6 78.3±36.0*※组 9 74.4±20.6*※组 10 54.3±13.3*#&0.05 与空白组比较 l，＃P﹤0.05 与模型组比较,&P﹤0.05 与对照0.05 与实验组比较。（对照组制作病理切片时脱落一只）
【参考文献】

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本文编号：2862166