丙泊酚通过GABA_A受体抑制Th2型哮喘炎症相关机制的研究

发布时间：2020-11-02 16:00

　　 背景:临床研究发现丙泊酚可以缓解哮喘病人的急性发作。鉴于T辅助细胞2型(T cell type 2,Th2)过度分化和凋亡抵抗在哮喘病理机制中的作用,A型γ-氨基丁酸(type A γ-aminobutyric acid,GABAA)受体存在于外周免疫系统并且参与免疫抑制,以及T细胞上有GABAA受体亚基的表达,课题组提出如下假设:丙泊酚可以通过抑制Th2细胞分化减轻Th2型哮喘炎症。其机制可能与促进分化过程中的Th2细胞凋亡和/或抑制Th2细胞增殖有关。丙泊酚通过兴奋GABAA受体实现上述抗炎作用。本课题目标是为丙泊酚安全用于哮喘患者提供抗炎相关理论基础。方法:本课题分为3个部分。第一部分是建立哮喘小鼠模型。第二部分是活体小鼠实验,应用第一步成功建立的鸡卵清蛋白(OVA)致敏及滴鼻激发的哮喘模型。在每次OVA滴鼻激发哮喘发作之前分别使用三种药物干预:丙泊酚、GABAA受体激动剂蝇蕈醇(muscimol)、阻断剂印防己毒素(picrotoxin)预处理后加用丙泊酚。取材检测肺组织病理大体炎性改变,包括肺组织苏木精-伊红染色(hematoxylin-esosin staining,HE)评分和肺泡灌洗液中炎性细胞计数。检测Th2型炎症特征性改变,包括肺泡灌洗液中特征性细胞因子白介素4(interleukin 4,IL-4)、肺组织磷酸化信号转导及激活因子(phosphorylated signal transducer and activator 6,pSTAT6)的表达。第三部分为离体细胞实验,提取健康小鼠脾脏,磁珠分选获得T细胞,并加入细胞因子刺激Th0细胞向Th2细胞方向分化。并分别使用以下药物干预:丙泊酚、蝇蕈醇、印防己毒素预处理后加用丙泊酚以及辅剂脂肪乳。5天分化过程完成后检测Th2型细胞因子IL-5分泌水平、细胞凋亡和细胞增殖指标。结果:在活体小鼠实验部分,丙泊酚和蝇蕈醇显著地降低了肺组织炎症病理学评分、肺泡灌洗液中炎症细胞的数目,以及Th2型细胞因子IL-4分泌和pSTAT6的表达水平。印防己毒素预处理组上述指标显著高于丙泊酚组。在离体细胞实验部分,丙泊酚和蝇蕈醇显著降低了 Th2型细胞因子IL-5的分泌,并引起Th2细胞凋亡比例显著增加。而印防己毒素预处理组上述指标高于丙泊酚处理组。上述药物处理均未显著降低细胞增殖指标。其辅剂脂肪乳组未显示出对于凋亡或者增殖的影响。结论:丙泊酚对于Th2型哮喘小鼠炎症有抑制作用,其作用是通过兴奋GABAA受体,促进分化过程中的Th2细胞凋亡进而实现抑制Th2细胞分化。
【学位单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R614
【部分图文】：

中国医学科学院?北京协和医学院?博士学位论文??镜下观察：肺组织切片ＨＥ染色可见支气管及血管周围炎性细胞浸润，以嗜酸??性粒细胞和淋巴细胞为主，气道上皮多处断裂或脱落，亦可见黏液细胞，基底膜轻??度增厚且形态不规则，细支气管平滑肌轻度肥大，支气管管壁轻度增厚。杯状细胞??增多，大量黏液分泌，肺组织内可见大量的肥大细胞颗粒。??与空白组相比，哮喘组支气管及血管周围出现大量的嗜酸性粒细胞浸润，胞核??多为两叶（马蹄形），胞浆ＨＥ染色多呈橘红色。血管和支气管周围炎症细胞浸润??显著增多，包括嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、肥大细胞等。哮喘组小鼠滴鼻激发组炎??症评分（４．５±０．４）显著高于雾化激发组（３．８±０．３）。??空白组?雾倾：ｉ：ｋ??

／?Ｚ?／?ｃ／?＜／与空白组相比，两组哮喘组（雾化吸入组总数、嗜酸性粒细胞及淋巴细胞数目均显著８．３＊１０５，?８．９＊１０５±６．２＊１０４，?１．０１＊１０６土７．９＊１组（分别为?６．０＊１０５±８＊１０４，２．５＊１０４±０．２＊１２．肺泡灌洗液中细胞总数（Ｔｏｔａｌ），肺泡灌洗泡灌洗液中淋巴细胞总数（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ）。＜０．０５?（与空白组相比），印＜０．０５?（与雾化．肺泡灌洗液中ＩＬ－４的表达水平??与雾化吸入组（１０２±２２ｐｇ／ｍＬ）相比，滴平（３５８±６０ｐｇ／ｍＬ）显著增高（见图３）。??ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ??１５００００－??

与空白组相比，滴鼻激发组ＧＡＴＡ－３、ｐＳＴＡＴ６的表达均显著増高（分别为０．９??±０．０５，?０．６２士０．２）?（，＜０．０５），而雾化激发组（０．６±０．０４，?０．２８土０．０６）显著低于??滴鼻激发组（＃ｐ＜〇．〇５），与空白组差异无显著性（见图４）。??Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｇｒｏｕｐｌ?ＧｒｏｕｐＡ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｇｒｏｕｐ?Ｉ?Ｇｒｏｕｐ?Ａ??遍細?ｐ?誦?ｎｉｕ??Ａｃｔｉｎ??ＢＷＨｌ?Ａｃｔｍ??ＧＡＴＡ－３?ｐＳＴＡＴ６??１５１?０－８－ｊ?＊＃??Ｉ?ｉ．〇－?＊＃?｜?０６－?丁??ｉ?＾??＾?丁．?Ｈ?０－４－?＊??ｓ…麵?Ｓ?ｉ?ｉ?Ｈ邊??〇／?ｙ?ｙ?／?／?＾??图４．肺组织中ＧＡＴＡ－３和磷酸化ＳＴＡＴ６的表达水平。（平均值士标准差，ｎ二１０）??＊户＜０．０５?（与空白组相比），＃／？＜０．０５?（与雾化组相比）??四、实验讨论??本部分结果通过比较滴鼻和雾化两种方式，确定了滴鼻诱发相比雾化激发，能??够诱发更加明显的Ｔｈ２型哮喘炎症。??滴鼻诱发哮喘需要考虑滴鼻溶液体积和ＯＶＡ药物剂量，以确定能够进入呼吸??道并且有效诱发变态反应的变应原剂量。有文献比较了不同体积的ＯＶＡ溶液滴入??小鼠鼻孔后溶液在上下呼吸道的分布情况，结论为体积过小（５ｐＬ）时药物不能进??入呼吸道，随着体积增加，进入呼吸道的药物比例增大，大于５０ｐＬ时，该比例不??再增加。该文献同时测定了麻醉状态与清醒状态下滴鼻进入呼吸道药物的比例，结??论为在麻醉状态下
【参考文献】

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1 李睿;刘恩梅;杨锡强;王莉佳;;不同饲养环境、种属、佐剂及激发方法对小鼠哮喘炎症的影响[J];重庆医学;2006年01期

2 杨伟敏;姜莹;旺静;丁隽;严国锋;袁春萍;刘吉宏;陈学进;;四种麻醉药物对小鼠自主意识恢复时间影响的观察[J];实验动物与比较医学;2009年02期

3 邹毅;赵晶;邢丽娇;辛鑫;庞宝森;黄克武;黄宇光;;异丙酚对哮喘小鼠气道高反应性和气道炎症的调节作用[J];中华麻醉学杂志;2013年03期

本文编号：2867254