基于靶点Osx的人工转录因子设计及miRNA筛选与功能研究

发布时间：2020-12-05 04:37

　　一、研究背景骨骼的发育和稳态依赖于骨形成与骨吸收两个过程,其中骨吸收由单核细胞来源的破骨细胞来介导,未分化间充质干细胞（Mesenchymal stem cell,MSC）来源的成骨细胞则在骨骼发育及骨的形成过程中起着重要作用。在成骨细胞分化过程中,转录因子Runx2/Cbfa1、Osterix（Osx,也称为Sp7）及ATF4高表达或特异性表达于成骨细胞并调控成骨标志物的表达,这些成骨标志物包括碱性磷酸酶（Alp）及骨钙素（Ocn）等。Runx2或Osx基因敲除小鼠不能形成成熟的成骨细胞及骨,因此Runx2与Osx被公认为成骨分化过程中的关键调节因子。Runx2主要表达于肥大前期软骨细胞及成骨细胞,在软骨生成与骨生成中起着多种作用。Osx,又称为sp7,是含有C2H2锌指结构的转录因子,特异性表达于软骨下骨和膜内骨的成骨细胞,处于Runx2/Cbfa1的下游,在成骨细胞分化及小鼠胚胎期、出生后及成年期的骨形成过程中起着必不可少的作用。人工转录因子（Artificial transcription factor,ATF）由DNA结合域、功能域（Effector domain,ED）和核... 

【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市

【文章页数】：137 页

【学位级别】：博士

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第一章 前言
第二章 基于成骨因子Osx为靶点的人工转录因子 的设计与功能研究
    2.1 基于成骨因子Osx为靶点的人工转录因子的设计
        2.1.1 材料与方法
        2.1.2 实验结果
        2.1.3 讨论
    2.2 人工转录因子激活Osx启动子活性分析
        2.2.1 材料与方法
        2.2.2 实验结果
        2.2.3 讨论
    2.3 ZFP2-VP64与Osx启动子结合特异性鉴定
        2.3.1 材料与方法
        2.3.2 实验结果
        2.3.3 讨论
    2.4 ZFP2-VP64促进Osx mRNA及蛋白水平上调
        2.4.1 材料与方法
        2.4.2 实验结果
        2.4.3 讨论
    2.5 ZFP2-VP64促进MC3T3-E1细胞与骨髓间充质干细胞的成骨分化
        2.5.1 材料与方法
        2.5.2 实验结果
        2.5.3 讨论
    2.6 ZFP2-VP64减少卵巢摘除术小鼠股骨局部骨丢失
        2.6.1 材料与方法
        2.6.2 实验结果
        2.6.3 讨论
    2.7 讨论
    2.8 小结
第三章 基于成骨因子Osx为靶点的micro RNAs筛选与功能研究
    3.1 基于成骨因子Osx为靶点的mi RNAs生物信息学筛选
        3.1.1 材料与方法
        3.1.2 实验结果
        3.1.3 讨论
    3.2 mi R-96及mi R-383与小鼠骨密度的相关性
        3.2.1 材料与方法
        3.2.2 实验结果
        3.2.3 讨论
    3.3 mi R-96与成骨细胞及骨髓间充质干细胞成骨分化的相关性
        3.3.1 材料与方法
        3.3.2 实验结果
        3.3.3 讨论
    3.4 mi R-96在MC3T3-E1细胞及骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用
        3.4.1 材料与方法
        3.4.2 实验结果
        3.4.3 讨论
    3.5 mi R-96的分子靶标研究
        3.5.1 材料与方法
        3.5.2 实验结果
        3.5.3 讨论
    3.6 HBEGF siRNA介导的HBEGF下调促进MC3T3-E1细胞的成骨分化
        3.6.1 材料与方法
        3.6.2 实验结果
        3.6.3 讨论
    3.7 HBEGF抑制mi R-96介导的MC3T3-E1细胞成骨分化
        3.7.1 材料与方法
        3.7.2 实验结果
        3.7.3 讨论
    3.8 讨论
    3.9 小结
全文结论
参考文献
文献综述Osterix蛋白在成骨分化和骨形成中的作用
    参考文献
攻读博士学位期间发表论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-374b-5p suppresses RECK expression and promotes gastric cancer cell invasion and metastasis[J]. Juan Xie,Zhi-Hui Tan,Xia Tang,Ming-Shu Mo,Yan-Ping Liu,Run-Liang Gan,Yi Li,Li Zhang,Guo-Qing Li.  World Journal of Gastroenterology. 2014(46)
[2]成骨细胞特异性转录因子Osterix对骨形成作用的分子机制(英文)[J]. 张驰.  北京大学学报(医学版). 2012(05)



本文编号：2898888