羽扇豆醇通过抗氧化应激抑制高糖环境下兔椎间盘髓核细胞凋亡

发布时间：2020-12-22 19:45

　　目的:羽扇豆醇,五环三萜类化合物,来源于羽扇豆属类植物,实验研究表明,它具有广泛的药用价值,有很强的抗氧化、保肝、抗突变、抗炎、抗风湿、抗肿瘤作用。近年来糖尿病发病率逐年升高,并成为影响中老年健康的主要原因之一。糖尿病发病率的逐年升高,随之伴随的慢性并发症成为困扰人类健康的重要原因比如:慢性血管损伤、高脂血症、肢体坏疽等。高糖环境下引起的氧化应激已被发现,氧化应激对身体各个器官及组织均有明显的损伤作用。研究已经表明:氧化应激引起的损伤是椎间盘退变的原因之一。本课题研究目的为:在高糖环境下,羽扇豆醇通过抗氧化应激作用抑制兔髓核细胞的凋亡。方法:本课题分为四组:对照组、高糖组、羽扇豆醇组、高糖+羽扇豆醇组;首先从兔椎间盘中分离提取髓核细胞,并进行培养,选用第三代髓核细胞进行实验。将30-70ug/ml浓度范围的羽扇豆醇培养基按照相同浓度梯度分为5组,对羽扇豆醇的最适浓度进行筛选,进而通过多功能孔板测读仪分别进行各组细胞内总ROS检测,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,荧光定量PCR检测Bcl-2、Bax、细胞色素C、Caspase 9/3基因表达,最后进行蛋白印迹分析Bcl-2、Bax、细胞色... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同培养时间的原代髓核细胞注：a.原代髓核细胞接种后细胞悬浮于培养液中呈圆形；b.原代细胞培养5d可见髓核细胞成簇生长；c.原代细胞培养2w后细胞可见小片状连接；d.髓核细胞培养第21后融合达到90%左右

图 2 髓核细胞鉴定结果：a. 甲苯胺蓝染色：NP 细胞甲苯胺蓝染色强阳性（200×）；b. 苏木精伊红染色：NP 细呈梭形、多角形，胞核呈圆形或椭圆形（200×）；c. 免疫组化染色：在 II 型胶原染色胞棕黄色（400×）；d. 免疫荧光染色：胞浆呈绿色荧光，与细胞核呈蓝色荧光（200×）。2.3.羽扇豆醇浓度筛选不同浓度的羽扇豆醇培养液（30–70μg/ml）培养髓核细胞 24 小时，应用 cck-8检测细胞的生长和增殖情况（图 3），羽扇豆醇浓度为 60μg/mL 时，对细胞的性最小，所以我们选用该浓度的羽扇豆醇为我们的实验浓度。表 1 各组细胞增殖活性（%）对照组 30ug/ml 40ug/ml 50ug/ml 60ug/ml 70ug/ml106.89 124.25 133.30 117.37 110.13 87.6997.39 120.3 121.72 99.01 104.26 70.6192.75 120.95 109.47 102.85 81.38 63.4093.80 107.03 96.17 110.63 96.02 68.85111.81 130.90 128 116.63 119.09 69.90

（图 3）增殖活性检测结果 Kit 检测结果显示：与对照组比较，羽扇豆醇组细胞增殖活性糖组细胞增殖活性明显受抑制(P <0.01)；高糖+羽扇豆醇组细于高糖组 (P <0.05)，但其增殖活性仍低于对照组及羽扇豆醇的统计学意义（见图 4）。表 2 各组髓核细胞增殖活性检查：吸光光度值（OD 值）对照组 高糖组 羽扇豆醇组 高糖+羽扇2.1210 1.7760 2.0023 1.9022.2460 1.7671 2.1240 1.8092.5730 1.5678 2.4721 2.0012.2340 1.5678 2.4710 1.8832.5620 1.2351 2.3728 1.954


本文编号：2932322