SRT1720在骨癌痛中的作用及病理机制研究
发布时间：2021-01-11 10:57
目的:骨癌痛（BCP）是由原发性骨癌或肿瘤转移引起的疼痛。越来越多的证据及我们以前的研究表明,沉默信息调节因子1（SIRT1）参与了BCP的外周致敏和中枢敏化,SIRT1在骨癌疼痛中的潜在机制可能为疼痛治疗提供一定的线索。SRT1720是SIRT1选择性激活剂,本文研究了SRT1720在病理性疼痛中的作用及分子机制。方法:将27只雌性SD大鼠随机分为Sham组,BCP组和BCP+SRT1720组,BCP组和BCP+SRT1720组通过将MRMT-1大鼠乳腺癌细胞注入到左胫骨中以建立乳腺癌的骨转移疼痛模型,Sham组在相同位置注入相同体积的HBSS。通过胫骨X光片,HE染色观察BCP组大鼠骨破坏程度,机械痛测试进行验证。建模12天后,SRT1720组鞘内注射SRT1720,Sham组和BCP组注射相同体积的DMSO+生理盐水（体积比1:1）,各组给药后0、1、3、5、7、12、18和24 h检测50%缩足阈值（PWT）;给药12 h后处死,通过Western Blot、免疫荧光、ELISA等实验方法检验各组相关蛋白的变化水平;采用TUNEL法检测BCP模型大鼠细胞凋亡情况。在体外实验中,...
【文章来源】： 郝苗苗 湖北科技学院
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
胫骨内注射MRMT-1细胞诱导了BCP大鼠的骨破坏和机械性异常疼痛
212鞘内注射SRT1720可降低BCP诱导的脊髓细胞凋亡信号脊髓背角对于处理包括疼痛知觉在内的感觉信息至关重要[32]。因此，我们检测了骨癌发生时脊髓背角的变化。组织学检查显示，与Sham组相比，BCP组的脊髓背角炎症细胞浸润增加（图2A）。该结果表明BCP诱导了脊髓的异常改变。TUNEL测定法旨在检测凋亡后期阶段发生大量DNA降解的凋亡细胞[33]。Sham组大鼠的脊髓背角显示很少的TUNEL阳性细胞，而BCP大鼠脊髓背角的TUNEL信号显著增加（图2B）。同时，与Sham大鼠相比，BCP大鼠的凋亡相关因子失调。BCP降低了抗凋亡因子Bcl-2的表达，增强了促凋亡因子BAX和介导凋亡相关底物裂解的caspase-3的表达水平（图2C–E）。这些结果表明BCP大鼠脊髓中的细胞凋亡被激活。将SRT1720（一种选择性SIRT1激动剂）鞘内注射到BCP大鼠的脊髓中。处理12小时后，检测其Bcl-2、BAX和caspase-3的表达。结果表明，SRT1720处理可上调BCP大鼠脊髓的Bcl-2表达，下调BAX和caspase-3的表达。这些数据表明，SRT1720抑制了BCP大鼠脊髓中的凋亡信号。图2.SRT1720对脊髓细胞凋亡信号的影响A.HE脊髓染色在Sham大鼠和BCP大鼠中均显示出炎性细胞浸润。B.TUNEL法检测Sham组和BCP组大鼠脊髓背侧凋亡细胞。比例尺=100μm。C.Sham，BCP和BCP+SRT1720大鼠脊髓中BAX蛋白含量的ELISA分析。*p<0.05vsSham组，＃p<0.05vsBCP组。（D,
3 SRT1720 逆转 BCP 对 SIRT1 活性的抑制作用 蛋白质印迹分析了 Sham 组大鼠，BCP 组大鼠和 BCP+SRT1720 组大鼠的脊髓中 SIRT1 的表达和活性（图 3）。SIRT1 的活性以 Ser47 处磷酸化的 SIRT1 表达水平表示[34]。如图 3 所示，BCP 组中总水平和磷酸化的 SIRT1 均降低，而SRT1720 处理恢复了磷酸化型 SIRT1（pSIRT1）的表达量。BCP+SRT1720 组大鼠中 pSIRT1/SIRT1 的相对值为 1.38±0.06（与 BCP 组相比，p <0.05，图 3D），表明 SIRT1 活性增加。这些结果表明，SIRT1 在 BCP 中的表达和活性均降低，而 SRT1720 则激活 SIRT1 的活性。
【参考文献】：
期刊论文
[1]SIRT1在小鼠肾缺血再灌注损伤中的作用及其对NF-κBp65-PGC-1α信号通路的影响[J]. 李璐,杨晶,张颖,蒋甘孺,孙京华,李胜开,尹忠诚. 中华肾脏病杂志. 2015 (02)
本文编号：2970643
【文章来源】： 郝苗苗 湖北科技学院
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
胫骨内注射MRMT-1细胞诱导了BCP大鼠的骨破坏和机械性异常疼痛
212鞘内注射SRT1720可降低BCP诱导的脊髓细胞凋亡信号脊髓背角对于处理包括疼痛知觉在内的感觉信息至关重要[32]。因此，我们检测了骨癌发生时脊髓背角的变化。组织学检查显示，与Sham组相比，BCP组的脊髓背角炎症细胞浸润增加（图2A）。该结果表明BCP诱导了脊髓的异常改变。TUNEL测定法旨在检测凋亡后期阶段发生大量DNA降解的凋亡细胞[33]。Sham组大鼠的脊髓背角显示很少的TUNEL阳性细胞，而BCP大鼠脊髓背角的TUNEL信号显著增加（图2B）。同时，与Sham大鼠相比，BCP大鼠的凋亡相关因子失调。BCP降低了抗凋亡因子Bcl-2的表达，增强了促凋亡因子BAX和介导凋亡相关底物裂解的caspase-3的表达水平（图2C–E）。这些结果表明BCP大鼠脊髓中的细胞凋亡被激活。将SRT1720（一种选择性SIRT1激动剂）鞘内注射到BCP大鼠的脊髓中。处理12小时后，检测其Bcl-2、BAX和caspase-3的表达。结果表明，SRT1720处理可上调BCP大鼠脊髓的Bcl-2表达，下调BAX和caspase-3的表达。这些数据表明，SRT1720抑制了BCP大鼠脊髓中的凋亡信号。图2.SRT1720对脊髓细胞凋亡信号的影响A.HE脊髓染色在Sham大鼠和BCP大鼠中均显示出炎性细胞浸润。B.TUNEL法检测Sham组和BCP组大鼠脊髓背侧凋亡细胞。比例尺=100μm。C.Sham，BCP和BCP+SRT1720大鼠脊髓中BAX蛋白含量的ELISA分析。*p<0.05vsSham组，＃p<0.05vsBCP组。（D,
3 SRT1720 逆转 BCP 对 SIRT1 活性的抑制作用 蛋白质印迹分析了 Sham 组大鼠，BCP 组大鼠和 BCP+SRT1720 组大鼠的脊髓中 SIRT1 的表达和活性（图 3）。SIRT1 的活性以 Ser47 处磷酸化的 SIRT1 表达水平表示[34]。如图 3 所示，BCP 组中总水平和磷酸化的 SIRT1 均降低，而SRT1720 处理恢复了磷酸化型 SIRT1（pSIRT1）的表达量。BCP+SRT1720 组大鼠中 pSIRT1/SIRT1 的相对值为 1.38±0.06（与 BCP 组相比，p <0.05，图 3D），表明 SIRT1 活性增加。这些结果表明，SIRT1 在 BCP 中的表达和活性均降低，而 SRT1720 则激活 SIRT1 的活性。
【参考文献】：
期刊论文
[1]SIRT1在小鼠肾缺血再灌注损伤中的作用及其对NF-κBp65-PGC-1α信号通路的影响[J]. 李璐,杨晶,张颖,蒋甘孺,孙京华,李胜开,尹忠诚. 中华肾脏病杂志. 2015 (02)
本文编号：2970643
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