EZH2对神经干细胞增殖的调控及其机制研究
发布时间：2021-01-13 09:23
目的:近些年来神经干细胞研究成为治疗诸如脊髓损伤等神经系统疾病的热点手段,而该治疗手段中调控和提高神经干细胞的增殖至关重要,本课题旨在研究EZH2基因对体外培养的神经干细胞细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响,并探究其潜在作用机制,拟为临床细胞学治疗脊髓损伤及相关疾病提供实验依据。方法:选取第3-6代正常人神经干细胞为实验对象。首先分别利用慢病毒构建稳转细胞株:EZH2基因过表达细胞（OV-EZH2）及其对照细胞（OV-Control）、EZH2基因shRNA敲降细胞（sh-EZH2）及其对照细胞（sh-Control）,并采用免疫荧光,western blot和real-time PCR多种手段鉴定稳转细胞株构建成功;其次通过CCK-8方法检测三个时间点下EZH2对神经干细胞的活性的影响,同时采用EdU染色法检测三个时间点下EZH2对神经干细胞增殖能力的影响;再次,通过流式细胞术检测四种细胞细胞周期及细胞凋亡率的变化情况;最后,western blot和real-time PCR方法检测调节细胞周期相关蛋白G1/S-特异性周期蛋白CyclinD1和增殖相关蛋白c-Myc在蛋白和mRNA...
【文章来源】：桂林医学院广西壮族自治区
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
EZH2基因过表达和敲降细胞稳转构建鉴定
S 期和 G2 期细胞数量代表着细胞增殖期细胞数量，为了研究 EZH2基因在神经干细胞增殖中具体的作用方式，研究利用细胞周期检测试剂盒对神经干细胞细胞周期各时期细胞比例进行分析。实验结果显示，相较于基因敲降阴性对照组（sh-Control），EZH2 干扰（sh-EZH2）组细胞处于G1 期细胞数量比例显著上调（图 3、表 1，P＜0.05），而 S 期和 G2 期细胞数量比例显著降低（图 3、表 1，P＜0.05），说明 EZH2 基因表达受到抑制之后，细胞被阻滞在 G1 期，进而造成了神经干细胞自我更新的抑制。反过来，研究中利用慢病毒对 EZH2 基因进行过表达，相较于对照组（OV-Control），在神经干细胞中 EZH2 过表达后(OV-EZH2)，细胞处于G1 期细胞数量比例显著下降（图 3、表 1，P＜0.05），而 S 期和 G2 期细胞数量比例显著上升（图 3、表 1，P＜0.05），证明 EZH2 基因能够促进细胞从 G1 期加速进入细胞周期 S 期和 G2 期从而促进细胞增殖。
OV-EZH2 68.09±0.88*19.28±1.20*11.59±1.42*F 4.87 5.76 7.48*P ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05sh-Control 78.24±1.36 11.49±0.81 6.82±0.53sh-EZH2 89.19±0.98#5.00±0.62#2.86±0.43#F 1.71 4.76 4.83#P ＜0.05 ＜0.05 ＜0.052.4 体外过表达或沉默 EZH2 对神经干细胞凋亡的影响细胞增殖和凋亡是细胞自我更新两个相反而又统一的两个方向，前研究发现 EZH2 能够调节神经干细胞细胞周期，同时又能增加细胞数量为了研究 EZH2 对细胞凋亡是否产生影响，研究采取流式细胞凋亡检测剂盒，对细胞凋亡水平进行分析。研究结果显示，EZH2 干扰组和 EZH表达组与其各自对照组相比，细胞凋亡水平均未有显著差异（图 4、表
【参考文献】：
期刊论文
[1]芒针透刺秩边-水道对脊髓损伤后尿潴留治疗机制及研究进展[J]. 张灿,全仁夫. 上海针灸杂志. 2019(01)
[2]EZH2抑制剂GSK126对激素性股骨头坏死骨髓间充质干细胞增殖的影响[J]. 孙庆鹏,皮红林,何继文,孙志博. 中国矫形外科杂志. 2018(23)
[3]脊髓损伤后神经源性膀胱临床治疗进展[J]. 张艳,李惠玲,何涛,牛见升,曾伟杰,赵力生,孙军弟,于慧金. 甘肃中医药大学学报. 2018(05)
[4]急性脊髓损伤后继发肺损伤发生机制的研究进展[J]. 王凤霞,吴霜. 中国康复. 2018(05)
[5]进一步重视脊髓损伤的基础与临床研究[J]. 李忠海,吕德成. 中国骨与关节杂志. 2018(10)
[6]继发性脊髓损伤微环境的研究进展[J]. 张盼,赵红卫,卢斌,彭龙. 海南医学. 2018(19)
[7]脊髓损伤神经源性肠道功能障碍研究进展[J]. 高涛,朱晓中,鲍丙波,李星玮,郑宪友. 上海交通大学学报(医学版). 2018(09)
[8]脊髓损伤的生物化学研究概况[J]. 方康权,曾宪辉. 医学理论与实践. 2018(18)
[9]脊髓损伤中TNF-α诱导细胞凋亡和坏死性凋亡的研究进展[J]. 李敏,杨孝,孙年怡,张安仁. 广东医学. 2018(18)
[10]芍药甘草汤对脊髓抑制性神经递质及大鼠脊髓损伤后肌痉挛的影响[J]. 黄勇,杨晓姣,申震,柴旭斌,周英杰. 中华中医药杂志. 2018(09)
博士论文
[1]热敏水凝胶承载Nafamostat修复脊髓损伤的实验研究[D]. 高仕杰.天津医科大学 2018
[2]极化巨噬细胞与脊髓来源神经干细胞联合移植对脊髓损伤治疗作用的研究[D]. 张坤.第四军医大学 2015
硕士论文
[1]高位脊髓损伤对大鼠心脏的损伤作用及异丙酚对其的影响[D]. 徐振东.第二军医大学 2005
本文编号：2974636
【文章来源】：桂林医学院广西壮族自治区
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
EZH2基因过表达和敲降细胞稳转构建鉴定
S 期和 G2 期细胞数量代表着细胞增殖期细胞数量，为了研究 EZH2基因在神经干细胞增殖中具体的作用方式，研究利用细胞周期检测试剂盒对神经干细胞细胞周期各时期细胞比例进行分析。实验结果显示，相较于基因敲降阴性对照组（sh-Control），EZH2 干扰（sh-EZH2）组细胞处于G1 期细胞数量比例显著上调（图 3、表 1，P＜0.05），而 S 期和 G2 期细胞数量比例显著降低（图 3、表 1，P＜0.05），说明 EZH2 基因表达受到抑制之后，细胞被阻滞在 G1 期，进而造成了神经干细胞自我更新的抑制。反过来，研究中利用慢病毒对 EZH2 基因进行过表达，相较于对照组（OV-Control），在神经干细胞中 EZH2 过表达后(OV-EZH2)，细胞处于G1 期细胞数量比例显著下降（图 3、表 1，P＜0.05），而 S 期和 G2 期细胞数量比例显著上升（图 3、表 1，P＜0.05），证明 EZH2 基因能够促进细胞从 G1 期加速进入细胞周期 S 期和 G2 期从而促进细胞增殖。
OV-EZH2 68.09±0.88*19.28±1.20*11.59±1.42*F 4.87 5.76 7.48*P ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05sh-Control 78.24±1.36 11.49±0.81 6.82±0.53sh-EZH2 89.19±0.98#5.00±0.62#2.86±0.43#F 1.71 4.76 4.83#P ＜0.05 ＜0.05 ＜0.052.4 体外过表达或沉默 EZH2 对神经干细胞凋亡的影响细胞增殖和凋亡是细胞自我更新两个相反而又统一的两个方向，前研究发现 EZH2 能够调节神经干细胞细胞周期，同时又能增加细胞数量为了研究 EZH2 对细胞凋亡是否产生影响，研究采取流式细胞凋亡检测剂盒，对细胞凋亡水平进行分析。研究结果显示，EZH2 干扰组和 EZH表达组与其各自对照组相比，细胞凋亡水平均未有显著差异（图 4、表
【参考文献】：
期刊论文
[1]芒针透刺秩边-水道对脊髓损伤后尿潴留治疗机制及研究进展[J]. 张灿,全仁夫. 上海针灸杂志. 2019(01)
[2]EZH2抑制剂GSK126对激素性股骨头坏死骨髓间充质干细胞增殖的影响[J]. 孙庆鹏,皮红林,何继文,孙志博. 中国矫形外科杂志. 2018(23)
[3]脊髓损伤后神经源性膀胱临床治疗进展[J]. 张艳,李惠玲,何涛,牛见升,曾伟杰,赵力生,孙军弟,于慧金. 甘肃中医药大学学报. 2018(05)
[4]急性脊髓损伤后继发肺损伤发生机制的研究进展[J]. 王凤霞,吴霜. 中国康复. 2018(05)
[5]进一步重视脊髓损伤的基础与临床研究[J]. 李忠海,吕德成. 中国骨与关节杂志. 2018(10)
[6]继发性脊髓损伤微环境的研究进展[J]. 张盼,赵红卫,卢斌,彭龙. 海南医学. 2018(19)
[7]脊髓损伤神经源性肠道功能障碍研究进展[J]. 高涛,朱晓中,鲍丙波,李星玮,郑宪友. 上海交通大学学报(医学版). 2018(09)
[8]脊髓损伤的生物化学研究概况[J]. 方康权,曾宪辉. 医学理论与实践. 2018(18)
[9]脊髓损伤中TNF-α诱导细胞凋亡和坏死性凋亡的研究进展[J]. 李敏,杨孝,孙年怡,张安仁. 广东医学. 2018(18)
[10]芍药甘草汤对脊髓抑制性神经递质及大鼠脊髓损伤后肌痉挛的影响[J]. 黄勇,杨晓姣,申震,柴旭斌,周英杰. 中华中医药杂志. 2018(09)
博士论文
[1]热敏水凝胶承载Nafamostat修复脊髓损伤的实验研究[D]. 高仕杰.天津医科大学 2018
[2]极化巨噬细胞与脊髓来源神经干细胞联合移植对脊髓损伤治疗作用的研究[D]. 张坤.第四军医大学 2015
硕士论文
[1]高位脊髓损伤对大鼠心脏的损伤作用及异丙酚对其的影响[D]. 徐振东.第二军医大学 2005
本文编号：2974636
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