降钙素对OA及正常大鼠组织来源软骨细胞-成骨细胞间交互作用和Wnt通路活性的影响

发布时间：2021-01-13 20:33

　　目的通过正常和OA大鼠的软骨细胞和软骨下骨的成骨细胞共培养体系,观察各组软骨细胞中Wnt信号通路关键分子的表达及软骨细胞和成骨细胞代谢相关因子的表达并进一步探讨降钙素（calcitonin,CT）对软骨细胞-成骨细胞间交互作用和Wnt信号通路活性的影响。方法14周龄SPF级雌性SD大鼠20只,10只通过前交叉韧带切断术（anterior cruciate ligament transection,ACLT）建立骨关节炎（osteoarthritis,OA）模型,10只做假手术对照,术后6周颈椎脱臼法处死SD大鼠,无菌条件下分离出双侧膝关节的软骨和软骨下骨,应用酶消法培养大鼠原代正常软骨细胞（normal chondrocytes,NC）、OA软骨细胞（osteoarthritis chondrocytes,OAC）、正常成骨细胞（normal osteoblast,NOB）、OA成骨细胞（osteoarthritis osteoblast,OAB）,并传代培养。通过阿尔新蓝染色、免疫荧光染色法（immunofluorescence,IF）检测Ⅱ型胶原（collagen typeⅡ,CO... 

【文章来源】：华北理工大学河北省

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

原代软骨细胞培养4天后细胞形态（40×）

华北理工大学硕士学位论文-14-应用酶消法提取成骨细胞后，培养瓶中呈现浑浊状态，原代接种5天后，可见细胞在细小骨块周围长出，细胞呈梭形或多边形，8天后成骨细胞生长聚集成为圆片状，靠近圆心处细胞较细长，伴有遮光性强的单核细胞。10天时细胞密度较高，呈梭型，折光性较差，呈弱旋涡状排列(如图2)。图2原代成骨细胞培养10天后细胞形态（40×）1.2.2软骨细胞阿尔新蓝染色软骨细胞阿尔新蓝染色为阳性，软骨细胞胞浆为蓝色，细胞核为蓝色（如图3）图3软骨细胞阿尔新蓝染色（100×）

华北理工大学硕士学位论文-14-应用酶消法提取成骨细胞后，培养瓶中呈现浑浊状态，原代接种5天后，可见细胞在细小骨块周围长出，细胞呈梭形或多边形，8天后成骨细胞生长聚集成为圆片状，靠近圆心处细胞较细长，伴有遮光性强的单核细胞。10天时细胞密度较高，呈梭型，折光性较差，呈弱旋涡状排列(如图2)。图2原代成骨细胞培养10天后细胞形态（40×）1.2.2软骨细胞阿尔新蓝染色软骨细胞阿尔新蓝染色为阳性，软骨细胞胞浆为蓝色，细胞核为蓝色（如图3）图3软骨细胞阿尔新蓝染色（100×）

【参考文献】：
期刊论文
[1]应用干细胞旁分泌效应治疗膝部骨关节炎的研究进展[J]. 陈闻波,蔡江瑜,孙亚英,陈俊,陈世益.  中国修复重建外科杂志. 2019(11)
[2]人工单髁关节置换术治疗超高龄膝关节骨关节炎患者的近期疗效[J]. 王方兴,薛华明,马童,文涛,杨涛,薛龙,涂意辉.  中国修复重建外科杂志. 2019(08)
[3]人骨关节炎软骨细胞的体外分离与培养[J]. 魏钰,魏民.  中国组织工程研究. 2019(25)
[4]骨代谢调节剂参与骨关节炎的治疗:作用、问题及前景[J]. 孔庆福,勾禹,田发明,张柳.  中国组织工程研究. 2018(24)
[5]骨关节炎流行病学研究[J]. 刘康妍,郑聪,胡海澜.  中华关节外科杂志(电子版). 2017(03)
[6]酶消化法联合组织块法培养大鼠原代成骨细胞[J]. 丁香莹,蔡劲薇,潘吉铭,梁敏.  中国组织工程研究. 2017(12)
[7]骨关节炎软骨内骨化病理研究进展[J]. 肖志锋,林定坤.  中国修复重建外科杂志. 2016(12)
[8]降钙素对白介素-1β诱导的大鼠软骨细胞炎性反应的作用[J]. 严晓苓,魏丽杰,王文雅,张柳.  解放军医药杂志. 2015(02)
[9]人正常及骨关节炎软骨细胞体外培养的对照研究[J]. 童迅,贠喆,张栋,赵新文,曾照辉,于洋,马保安.  现代生物医学进展. 2013(24)



本文编号：2975521