PI3K/Akt/mTOR调控血管内皮细胞自噬在激素性股骨头坏死中的实验研究

发布时间：2021-01-20 21:25

　　目的:肾上腺皮质激素可引起激素性股骨头缺血坏死,其机制复杂,目前研究表明,血管内皮细胞损伤、差异表达基因的调控以及骨细胞自噬等参与了SANFH的发病过程。但血管内皮细胞与自噬之间的关系及调控机制尚不明确。本研究旨在探讨血管内皮细胞自噬在SANFH中的作用,通过研究PI3K/Akt/mTOR信号通路和自噬相关基因来探讨股骨头血管内皮细胞自噬与SANFH之间的关系,同时研究mTOR-shRNA对血管内皮细胞损伤可能具有的修复作用。方法:研究采用体外培养大鼠股骨头血管内皮细胞的方法,同时进行mTOR-shRNA腺病毒转染,分组后于4个时间点（12、24、48、72h）利用透射电镜观察各组自噬体形成情况;利用RT-PCR检测PI3K、Akt、mTOR、Beclin1、MAP1LC3的mRNA表达;利用Western blot、免疫荧光法检测上述因子的蛋白表达情况;利用ELISA法检测血管内皮细胞损伤标志物6-keto-PGF1α表达情况。最后应用统计学方法进行分析,统计各时间点实验组与对照组之间是否有统计学差异。结果:（1）激素抑制了VEC生理性自噬,mTOR-shRNA可增强自噬水平;（2）... 

【文章来源】：内蒙古医科大学内蒙古自治区

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

VEC细胞CD31和FactorⅧ蛋白染色情况

内蒙古医科大学硕士研究生学位论文素抑制了 VEC 生理性自噬，mTOR-shRNA 可增强自噬水平们采用透射电镜进行 VEC 自噬体观察，由图 2 可见，三组视野内均可见自照组为生理性自噬强度，激素组（MP）中自噬体数量明显少于对照组，mTOR 组则介于这两组之间，说明甲基强的松龙可抑制 VEC 自噬，作用制自噬的效果也越明显。而 mTOR-shRNA 可使 mTOR 表达下调，抑制了对自噬的抑制作用，增强了自噬水平，但其仍低于生理性自噬水平。ctrl MP MP+shmTOR

RT-PCR定量检测PI3K、Akt、mTOR、Beclin1、LC3的mRNA表达变化

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：2989813