组蛋白去乙酰化酶4在年龄相关骨关节炎中的作用及其作用机制的研究

发布时间：2021-01-28 13:33

　　目的:观察成人膝关节OA患者软骨组织中HDAC4的表达情况,并利用条件性敲基因小鼠敲除小鼠体内的HDAC4以观察小鼠膝关节炎的发生,并进一步检测与HDAC4相关的细胞因子的表达变化,探究HDAC4在骨关节炎中的作用及其机制。方法:1.通过番红O固绿染色观察成人胫骨平台关节炎表现,行HDAC4免疫组化观察OA患者与正常成人HDAC4表达改变。2.培育Agg^{tm（IRES-CreERT2）};HDAC4^fl/fl条件性基因敲除鼠,将Agg^{tm（IRES-CreERT2）};HDAC4^fl/fl小鼠（共40只）分为TM组（20只）和NO TM组（20只）,选取HDAC4^fl/fl（20只）作为TM的对照组（TM control）。两月龄TM组小鼠和TM control组小鼠注射TM（1mg/0.01kg/day,连续注射5天）;NO TM组注射植物油,方法同TM注射组。注射后小鼠自由活动。自然生长至8月龄的小鼠在处死后行番红O固绿染色观察小鼠膝关节退行性变化并通过OARSI评分量化改变,... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
常用缩写词中英文对照表
前言
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验动物
        1.1.2 主要仪器
        1.1.3 主要药品及试剂
        1.1.4 主要溶液配制方法
        1.1.5 组织获取器械
    1.2 实验方法和具体实验步骤
        1.2.1 成人膝关节软骨组织的取材、固定、切片
tm（IRES-CreERT2）/+;HDAC4^fl/fl条件性敲基因小鼠的繁育">        1.2.2 Agg^{tm（IRES-CreERT2）/+};HDAC4^fl/fl条件性敲基因小鼠的繁育
        1.2.3 实验动物分组
        1.2.4 实验动物的处理
        1.2.5 PCR确定小鼠基因型
            1.2.5.1 消化至基因组DNA
tm（IRES-CreERT2）基因与HDAC4^fl/fl基因扩增">            1.2.5.2 Agg^{tm（IRES-CreERT2）}基因与HDAC4^fl/fl基因扩增
            1.2.5.3 2 %琼脂糖凝胶电泳
        1.2.6 小鼠膝关节取材、固定、切片
        1.2.7 番红O固绿染色
        1.2.8 OARSI评分
        1.2.9 HDAC4、Runx-2、Sox-9、CollagenX、MMP-13、Aggrecan、CollagenⅡ免疫组化
        1.2.10 Rt-PCR检测
            1.2.10.1 软骨组织中总RNA的提取
            1.2.10.2 Rt-PCR检测HDAC4、Agg、ColⅡ、Runx2、Sox-9、ColX、Ihh、MMP-13、PTHrP和Gli1基因mRNA表达水平
        1.2.11 数据处理
2 结果
    2.1 成人膝关节OA
    2.2 成人膝关节软骨 HDAC4 免疫组化
    2.3 子代小鼠基因型鉴定与筛选
tm（IRES-CreERT2）/+;HDAC4^fl/fl基因型小鼠与野生型小鼠对比">    2.4 两月龄未打药Agg^{tm（IRES-CreERT2）/+};HDAC4^fl/fl基因型小鼠与野生型小鼠对比
    2.5 HDAC4基因的敲除
    2.6 8 月龄各组小鼠膝关节改变及OARSI评分
    2.7 免疫组化检测HDAC4基因敲除小鼠软骨细胞肥大化及骨关节炎相关因子表达量的改变
    2.8 Rt-PCR检测HDAC4基因敲除小鼠软骨细胞肥大化及骨关节炎相关因子表达量的改变
3 讨论
4 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
在学期间承担/参与的科研课题与研究成果
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]Efficacy and safety evaluation of intravenous infusion of cervus and cucumis polypeptides for treatment of avascular necrosis of the femoral head: a randomized clinical trial[J]. Wei Liyou,Zhang Hongwei,Li Xinmin,Yang Chunyan,Wang Guoqiang,Zhang Lifeng,Cui Mingwu,Han Lijun.  Journal of Traditional Chinese Medicine. 2016(01)
[2]Intraarticular injections（corticosteroid, hyaluronic acid, platelet rich plasma） for the knee osteoarthritis[J]. Egemen Ayhan,Hayrettin Kesmezacar,Isik Akgun.  World Journal of Orthopedics. 2014(03)



本文编号：3005082