钙敏感受体在大鼠脊髓神经元细胞缺氧复氧损伤中的表达变化及其意义

发布时间：2017-04-12 09:05

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【摘要】：目的:观察大鼠脊髓神经元细胞缺氧复氧损伤中钙敏感受体的表达变化及其和细胞凋亡的相关性。方法:利用原代培养的新生SD大鼠脊髓神经元建立缺氧-复氧损伤(A/R)模型,随机分成4组:正常对照组、缺氧-复氧组(A/R)、激活组(A/R+GdCl3)、抑制组(A/R+NPS2390)。应用Hoechest33258染色观察各组脊髓神经元凋亡。应用免疫荧光技术分析钙敏感受体及钙蛋白酶蛋白在脊髓神经元的表达定位。运用蛋白质印迹技术检测钙敏感受体、钙蛋白酶、Bax蛋白在不同处理组中的表达变化。结果:1.钙敏感受体和钙蛋白酶分布于脊髓神经元细胞的胞膜、胞浆和突起。2.缺氧-复氧组较对照组相比,CaSR、钙蛋白酶、Bax蛋白表达升高,同时细胞凋亡增加。3.较缺氧-复氧组相比,激活组进一步升高了CaSR、钙蛋白酶、Bax蛋白的表达;而抑制组上述作用相反。结论:1.大鼠脊髓神经元中存在钙敏感受体和钙蛋白酶的表达,且都分布于脊髓神经元细胞的胞膜、胞浆和突起部。2.缺氧-复氧可激活CaSR,并且增加脊髓神经元的凋亡。应用激动剂GdCl3可以加重原本存在的缺氧复氧损伤,增加凋亡;抑制剂NPS2390作用相反。说明CaSR参与了缺氧-复氧诱导的脊髓神经元凋亡的过程。3.CaSR的激动或者抑制,都伴随着钙蛋白酶表达的升高或降低,说明在缺氧-复氧诱导的脊髓神经元凋亡的过程中,CaSR与钙蛋白酶存在正相关性。4.应用抑制剂NPS2390可以明显抑制细胞凋亡,减少细胞缺氧-复氧损伤。因此,特异性的CaSR抑制剂或将成为治疗脊髓缺血再灌注损伤的一种行之有效的方法。
【关键词】：钙敏感受体 钙蛋白酶 脊髓神经元 缺氧-复氧 凋亡
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R651.2
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 1.引言8-11
• 2.实验材料11-15
• 2.1.实验试剂与材料11
• 2.2.主要仪器11-12
• 2.3.试剂的配置12-15
• 2.4.实验动物15
• 3.实验方法15-20
• 3.1 新生大鼠脊髓神经元细胞的培养15-16
• 3.2. 免疫荧光鉴定神经元以及检测CaSR，，钙蛋白酶的表达定位16
• 3.3. 细胞缺氧复氧模型的建立16-17
• 3.4. 实验分组17
• 3.5. 检测指标17-20
• 3.6.统计学分析20
• 4.实验结果20-23
• 4.1. 脊髓神经元形态学变化20
• 4.2. 神经元细胞的鉴定20
• 4.3. Hoechest33258染色观察凋亡结果20-21
• 4.4. 免疫荧光检测结果21
• 4.5. Ca SR、Calpain、bax蛋白的表达21-23
• 5.讨论23-27
• 6.结论27-28
• 参考文献28-34
• 综述34-46
• 参考文献41-46
• 附录：主要略缩词一览表46-48
• 攻读硕士期间发表的文献48-49
• 致谢49

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本文编号：301137