miR-494-3p靶向HTRA1调节瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学功能及机制研究

发布时间：2021-02-03 06:19

　　目的:瘢痕一直以来都是整形外科领域的一大难题。创伤后过度的修复会导致病理性瘢痕的形成,病理性瘢痕主要包括瘢痕疙瘩和增生性瘢痕。TGF-β1是伤口愈合后强有力的生长因子,被认为是瘢痕疙瘩和其他纤维化疾病的关键调控因子,TGF-β1与TGF-β受体结合后将激活信号传导到细胞核内,激发多种信号转导途径,来调控瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖过程。HTRA1是一种热激性蛋白,属于HTRA家族成员之一。研究发现,HTRA1在肿瘤中具有剪切细胞内TGF-β1前体进而抑制TGF-β1信号通路的作用。鉴于HTRA1为TGF-β1的抑制基因,且HTRA1的异常表达与众多肿瘤有关,尽管瘢痕疙瘩没有恶性征象,但其某些特征包括超出原有创伤范围、持续性生长并极易复发等又与恶性肿瘤有一定相似性。因此,本研究旨在首先明确HTRA1在瘢痕疙瘩中的表达水平、生物学功能以及潜在作用机制。然后在前期工作的基础上。进一步研究靶向HTRA1的miRNA对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学功能的影响。方法:在HTRA1研究阶段,从组织水平,收集瘢痕疙瘩和正常皮肤组织各26例,应用RT-PCR、western blot和免疫组化技术检测HTRA1和... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：109 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

HTRA1和TGF-β1在瘢痕疙瘩和正常组织中表达水平

高于正常皮肤；E：免疫组织化学染色检测正常皮肤组织和瘢痕疙瘩中示 HTRA1 的表达在瘢痕疙瘩中明显高于正常皮肤；F: 免疫组织化学染瘢痕疙瘩中 TGF-β1 表达，结果显示 TGF-β1 的表达在瘢痕疙瘩中明显正常皮肤；KL：Keloid）。放大倍数 200x，* P<0.05；**P<0.01。痕疙瘩中 Smad 信号通路活化水平检测ds 通路是 TGF-β1 信号转导中最重要的通路，Smad2 是 TGF-β信号分子，在 TGF-β1 生物学效应的发挥中起重要作用。因此，肤组织和瘢痕疙瘩中 Smad2 总蛋白含量以及磷酸化水平。免疫常皮肤组织和瘢痕疙瘩中均可以检测到 Smad2 总蛋白以及磷酸织相比，瘢痕疙瘩 Smad2 总蛋白含量没有发生明显变化；瘢痕ad2（p-Smad2）水平显著高于正常皮肤组织，差异有统计学意些结果说明，瘢痕疙瘩中 Smads 通路活化水平升高。

图 3 活性 TGF-β1 诱导 PAI-1 介导的荧光素酶基因表达报告载体的构建示意图；B：将重组质粒转染到 HEK293TTGF-β1（10ng，200ng，500ng，1μg）的细胞中测定荧光素酶基因表达强度，而非活性 TGF-β1 不能激活荧光素酶基因向调节瘢痕疙瘩成纤维细胞中 latent TGF-成功分离瘢痕疙瘩中成纤维细胞，并用非活性 TRA1）单独或组合处理。24h 后，应用 Western blot细胞中 Smad2 的磷酸化水平和上清液中活性 TGF于 rhHTRA1 或非活性 TGF-β1 的成纤维细胞中 Sm 量均明显升高（图 4A 和 B）。此外，rhHTRA1 和强成纤维细胞中 Smad2 的磷酸化水平和活性 TG


本文编号：3016042