人骨肉瘤细胞U2OS靶向肽的筛

发布时间：2021-02-04 14:26

　　骨肉瘤是一种好发于青少年的恶性骨肿瘤。现阶段主流的治疗手段是术前大剂量化疗、根治性切除及术后继续大剂量化疗。自上世纪八十年代以来,骨肉瘤患者总生存率长期处于平台期,原发性骨肉瘤患者五年生存率约为60%-70%。现阶段骨肉瘤的治疗受限于缺乏能直接将药物递送到肿瘤细胞的靶向载体。筛选与鉴别肿瘤细胞表面受体的特异性配体,是目前肿瘤研究的热点,新兴的噬菌体展示技术是这一领域的强大工具,将可能促进肿瘤诊断和靶向治疗的发展。目的:利用噬菌体展示技术筛选并鉴定对人骨肉瘤U2OS细胞具有高度亲和力和特异性的多肽,进一步将靶向多肽与金纳米笼偶联,评价多肽靶向热疗骨肉瘤细胞的能力（图1）,为进一步开发人骨肉瘤的靶向治疗提供基础。方法:1.以U2OS作为靶细胞,人成骨细胞hFOB1.19为阴性消减细胞,对Ph.D.-12噬菌体展示文库进行全细胞差减筛选。首先将噬菌体文库与hFOB1.19细胞充分结合,排除与hFOB1.19结合,即非特异性结合靶细胞的部分噬菌体,将剩下的文库与U2OS充分结合,洗涤后去除特异性与亲和力较低的噬菌体,通过洗脱及酸化裂解得到对U2OS具有较高特异性和亲和力的噬菌体（包括"细胞表面... 

【文章来源】：广州中医药大学广东省

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
引言
第一章 人骨肉瘤细胞U20S特异性结合噬菌体的筛选及鉴定
    1. 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
        1.3 统计分析
    2. 结果
        2.1 四轮体外筛选后噬菌体滴度测定结果
        2.2 单克隆噬菌体的DNA序列测定结果:
        2.3 单克隆噬菌体富集率
        2.4 噬菌体酶联免疫吸附测定结果
        2.5 人骨肉瘤组织体外免疫组织化学染色检测结果
    3. 讨论
    4. 小结
第二章 人骨肉瘤细胞U20S特异性结合多肽的筛选及鉴定
    1. 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
        1.3 统计分析
    2. 结果
        2.1 多肽亲和力实验结果
        2.2 噬菌体与多肽竞争性结合人骨肉瘤细胞U20S实验结果
        2.3 多肽与噬菌体竞争性结合人骨肉瘤细胞U20S实验结果
    3. 讨论
    4. 小结
第三章 靶向多肽偶联金纳米笼光热治疗人骨肉瘤细胞U20S的效果研究
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
        1.3 统计分析
    2 结果
        2.1 多肽偶联金纳米笼
        2.2 CCK-8法检测多肽-金纳米笼光热治疗效果
        2.3 活细胞/死细胞染色检测多肽-金纳米笼光热治疗效果
    3 讨论
    4 小结
结语
参考文献
附录
研究生在学期间发表论文情况
统计学审核证明
致谢



本文编号：3018464