大麻素2型受体介导小胶质细胞极化减轻手术麻醉引起的神经炎症及机制

发布时间：2021-02-10 00:27

　　背景:手术创伤可引起炎性介质通过受损的血脑屏障进入大脑引发神经炎症。海马区域的炎症会导致术后认知功能障碍（Postoperative cognitive dysfunction,POCD）。在大脑炎症期间小胶质细胞向促炎M1或抗炎M2极化的过程被认为是一种主要的免疫调节方式。内源性大麻素是一种具有抗炎作用的化合物,主要有两种生理性配体。先前有研究发现大麻素受体2型受体（Cannabinoid Receptor-2,CB2R）的活化减少术后小鼠小胶质细胞的活化和脑内炎症。然而,CB2R的活化对术后小胶质细胞极化是否有影响尚不清楚。本课题主要探讨了七氟烷麻醉下术后CB2R的活化对小胶质细胞极化的作用。实验方法:使用4月龄C57/6成年雄性小鼠。小鼠随机分为对照组,手术组,手术+JWH133组和手术+AM630组。采用胫骨骨折内固定手术模型。在小鼠手术麻醉恢复后腹腔注射选择性CB2R特异性激动剂JWH133和拮抗剂AM630,每24小时重复注射。手术后1天和3天分别处死小鼠,获取脑组织。使用蛋白质免疫印迹技术检测前额叶及海马中CB2R的表达水平（n=24）。酶联免疫吸附实验检测术后1天和3天... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中英文缩略词表
中文摘要
英文摘要
1 引言
2 材料与方法
    2.1 实验动物
    2.2 实验仪器
    2.3 实验试剂
    2.4 试剂配制
    2.5 实验方法
        2.5.1 实验分组
        2.5.2 实验方案
        2.5.3 麻醉及手术模型
        2.5.4 组织提取及保存
        2.5.5 蛋白质免疫印迹实验（Western Blot）
            2.5.5.1 组织样本制备
            2.5.5.2 BCA蛋白浓度测定
            2.5.5.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶配制
            2.5.5.4 上样及蛋白电泳
            2.5.5.5 转膜
            2.5.5.6 丽春红染色及封闭
            2.5.5.7 免疫杂交
            2.5.5.8 蛋白质显影
            2.5.5.9 图像分析
        2.5.6 酶联免疫吸附实验（ELISA）
            2.5.6.1 准备及配制试剂
            2.5.6.2 加样
            2.5.6.3 加入生物素标记抗体工作液
            2.5.6.4 洗涤孔板
            2.5.6.5 加入HRP-advin工作液
            2.5.6.6 洗板及显色
            2.5.6.7 终止显色
            2.5.6.8 结果判定
        2.5.7 免疫荧光
        2.5.8 实时定量 PCR（Quantitative Real-time PCR,RT-q PCR）
            2.5.8.1 RNA 提取（Trizol 法）
            2.5.8.2 逆转录及cDNA合成
            2.5.8.3 基因扩增
                2.5.8.3.1 配制反应体系
                2.5.8.3.2 进行RT-qPCR反应
                2.5.8.3.3 确认RT-qPCR结果
        2.5.9 数据统计分析
3 结果
    3.1 七氟烷麻醉下手术1天后前额叶和海马中炎症因子水平
    3.2 七氟烷麻醉下手术3天后前额叶和海马中炎症因子水平
    3.3 七氟烷麻醉下手术1天后前额叶和海马中CB2R的表达
    3.4 七氟烷麻醉下手术3天后前额叶和海马中CB2R的表达
    3.5 七氟烷麻醉下术后1天小胶质细胞的极化表型
    3.6 七氟烷麻醉下术后3天小胶质细胞的极化表型
4 讨论
5 结论
6 参考文献
附录
致谢
综述 大脑中大麻素2型受体的表达,功能及在行为和神经精神疾病中的研究进展
    参考文献



本文编号：3026479