骨肉瘤外泌体miR-1307对骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

发布时间：2021-02-14 03:52

　　目的:骨肉瘤（Osteosarcoma,OS）是青少年最常见的恶性骨肿瘤,全世界的发病率约0.0004%。骨肉瘤的发生与多种micro RNAs（mi RNAs）的异常表达相关。外泌体（Exosome,Exos）mi RNAs在细胞间通讯中受到越来越多的关注。肿瘤来源的外泌体可以促进肿瘤细胞的生长及其肿瘤血管生成。mi R-1307已被发现在多种肿瘤中异常表达,但其在骨肉瘤中的研究迄今为止没有相关报道。本研究旨在检测骨肉瘤来源的外泌体mi R-1307对骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法:购买人骨肉瘤细胞系（U2OS、HOS、SW1353、Saos-2和143B）和人正常成骨h FOB 1.19细胞系。培养SW1353骨肉瘤细胞和h FOB 1.19正常成骨细胞,通过差速离心法提取骨肉瘤外泌体（OS-Exos）和正常成骨细胞外泌体（h FOB 1.19-Exos）。透射式电子显微镜（Transmission Electron Microscope,TEM）和纳米粒子追踪分析（Nanoparticle Tracking Analysis,NTA）验证所分离的细胞外颗粒是否为外泌... 

【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

骨肉瘤外泌体的特征及其鉴定

骨肉瘤外泌体miR-1307对骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响32（1.86±0.14），与对照组相比，骨肉瘤外泌体（OS-Exos）显著促进了骨肉瘤细胞的增殖水平，差异具有统计学意义（P＜0.01）。以上数据表明骨肉瘤外泌体以旁分泌的方式促进骨肉瘤细胞的生长，符合研究初期的预测。图2：hFOB1.19成骨细胞的外泌体（hFOB1.19-Exos）和骨肉瘤外泌体（OS-Exos）对骨肉瘤细胞增殖能力的影响。转染hFOB1.19-Exos或OS-Exos后不同时间骨肉瘤细胞增殖能力的代表性图像。*P＜0.05，**P＜0.013骨肉瘤外泌体促进骨肉瘤细胞的迁移和侵袭细胞增殖实验结果表明骨肉瘤外泌体可以明显的促进骨肉瘤细胞的增殖，所以接下来进一步验证骨肉瘤外泌体对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响。首先分别培养SW1353骨肉瘤细胞和hFOB1.19成骨细胞并分别提取相应细胞所分泌的外泌体。骨肉瘤外泌体（OS-Exos）和hFOB1.19成骨细胞的外泌体（hFOB1.19-Exos）分别作为实验组和正常对照组，通过Transwell检测骨肉瘤细胞的迁移（小室内不含基质胶）和侵袭（小室内含有基质胶）的细胞数。Transwell迁移结果表明，hFOB1.19-Exos（33±3.7），OS-Exos（125±9.6），骨肉瘤外泌体（OS-Exos）使骨肉瘤细胞迁移的细胞数明显大于对照组(图3A)，差异具有统计学意义（P＜0.01）。同样Transwell侵袭结果表明，hFOB1.19-Exos（28±5.6），OS-Exos（132±10.9），与对照组相比，骨肉瘤外泌体（OS-Exos）使骨肉瘤细胞侵袭的细胞数明显增多(图3B)，差异具有统计学意义（P＜0.01）。结果表明，骨肉瘤外泌体以旁分泌的方式促进骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。

骨肉瘤外泌体miR-1307对骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响33图3：hFOB1.19成骨细胞外泌体（hFOB1.19-Exos）和骨肉瘤外泌体（OS-Exos）对骨肉瘤细胞迁移(A)和侵袭(B)能力影响的代表性图像。比例尺：100um。**P<0.014骨肉瘤外泌体抑制骨肉瘤细胞的凋亡既然骨肉瘤外泌体既可以促进骨肉瘤细胞的增殖，也可以促进骨肉瘤细胞的迁移和侵袭，那么接下来进一步通过流式细胞术（FlowCytometry）验证骨肉瘤外泌体对骨肉瘤细胞凋亡水平的影响。首先，依然分别培养SW1353骨肉瘤细胞和hFOB1.19成骨细胞并分别提取相应细胞所分泌的外泌体，骨肉瘤细胞外泌体（OS-Exos）和hFOB1.19成骨细胞外泌体（hFOB1.19-Exos）分别作为实验组和正常对照组。FlowCytometry早期凋亡率结果表明，hFOB1.19-Exos（31.33±0.19）%，OS-Exos（3.3±0.62）%，与对照组相比，经骨肉瘤外泌体（OS-Exos）处理的骨肉瘤细胞其早期凋亡细胞明显减少(图4)，差异具有统计学意义（P＜0.01）。FlowCytometry晚期凋亡率结果表明，hFOB1.19-Exos（0.73±0.12）%，OS-Exos（0.5±0.08）%，差异无统计学意义。FlowCytometry总凋亡率结果表明，hFOB1.19-Exos（32.07±1.23）%，OS-Exos（3.1±0.65）%，与对照组相比，骨肉瘤外泌体（OS-Exos）明显抑制了骨肉瘤细胞的凋亡水平，差异具有统计学意义（P＜0.01）。以上数据表明骨肉瘤外泌体以旁分泌的方式抑制骨肉瘤细胞的凋亡。

【参考文献】：
期刊论文
[1]Anticancer Effects of Constituents of Herbs Targeting Osteosarcoma[J]. SU Qing-hong,XU Xiao-qun,WANG Jun-fu,LUAN Jun-wen,REN Xia,HUANG Hai-yan,BIAN Si-shan.  Chinese Journal of Integrative Medicine. 2019(12)



本文编号：3033067