MiR-421通过调控MCPIP1蛋白通路促进骨肉瘤疾病进展的机制研究

发布时间：2021-02-15 17:54

　　前言:骨肉瘤（osteosarcoma）是原发性恶性骨肿瘤中最常见的类型,在全世界的发病率大概是1-3/百万。骨肉瘤主要的临床症状为逐渐加重的持续性的局部疼痛,可伴有包块、肢体活动障碍,皮温升高,夜间痛尤甚,低生存率和疼痛使患者背负着极大的痛苦和生存压力。骨肉瘤主要的发病人群为青少年,但在50岁以上人群中有一个二次峰值。骨肉瘤是由恶性成骨细胞产生未成熟骨或骨样组织,可在组织学上分为:传统型或经典型、低级的中央型、骨膜型、骨膜旁型、毛细血管扩张型、小细胞型和成软骨细胞型。目前临床治疗骨肉瘤的主要方法是手术切除联合新辅助化疗。然而,单纯手术的患者5年生存率大概在15-17%。手术切除联合新辅助化疗（阿霉素、顺铂、加或不加甲氨蝶呤）,这样治疗方案的进步可以使5年生存率达到70%左右。但是,转移或复发的骨肉瘤患者的生存率仍约20%左右。免疫治疗在骨肉瘤的治疗中发挥着重要的作用,因为骨细胞与免疫系统细胞之间存在着重要的交叉和桥梁,开创了骨免疫学的跨学科新领域。许多信号传导通路RANK-RANKL system,IL?1,IL?6,IL?17和transforming growth factor?... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：83 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :MiR-421在人骨肉瘤组织中的高表达并与疾病进展程度相关
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 组织标本收集
        2.2 提取骨肉瘤组织和癌旁组织的总RNA
        2.3 琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量
        2.4 逆转录
        2.5 计算表达数值
        2.6 统计分析
    3 结果
        3.1 MiR-421在人骨肉瘤组织中高表达并其表达与疾病进展相关
        3.2 MCPIP1在人骨肉瘤组织中低表达并与疾病进展相关
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :MiR-421 促进骨肉瘤MG63和U2OS细胞的增殖和迁移
    1 引言
    2 实验材料和方法
        2.1 人骨肉瘤MG63和U2OS细胞培养
        2.2 MG63和U2OS细胞解冻
        2.3 MG63和U2OS细胞传代
        2.4 MG63和U2OS细胞再冻存
        2.5 MG63和U2OS细胞转染
        2.6 Real-time PCR和细胞转染效率
        2.7 Western blot实验
        2.8 MTT比色法检测miR-421对MG63和U2OS细胞增殖的影响
        2.9 Transwell小室内突破法检测miR-421对MG63和U2OS细胞迁移和侵袭的影响
        2.10 统计分析
    3 结果
        3.1 MiR-421 促进体外骨肉瘤MG63和U2OS细胞的增殖
        3.2 MiR-421 可以增加MG63 细胞和U2OS细胞中增殖相关因子cyclinD1 和抑制凋亡因子bcl-2的表达
        3.3 MiR-421 可以促进骨肉瘤MG63 细胞和U2OS细胞的迁移
        3.4 MiR-421 可以增加骨肉瘤MG63和U2OS细胞中迁移相关因子MMP2 的表达
        3.5 MiR-421 可以促进骨肉瘤MG63 细胞和U2OS细胞中促炎因子IL-6 的释放
    4 讨论
    5 结论
第三部分 :MiR-421 可以通过调控MCPIP1 蛋白促进骨肉瘤的疾病进展
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 生物信息学预测并验证MCPIP1与miR-421 是否有共同的3?-UTR靶点
        2.2 人骨肉瘤MG63细胞培养
        2.3 MG63细胞传代
        2.4 MG63细胞再冻存
        2.5 MG63细胞转染
        2.6 Real-time PCR和细胞转染效率
        2.7 Western blot实验
        2.8 MTT比色法检测miR-421 是否通过MCPIP1 影响MG63 细胞的增殖
        2.9 Transwell小室内突破法检测miR-421 是否通过MCPIP1 影响MG63 细胞迁移和侵袭
        2.10 裸鼠骨肉瘤成瘤动物模型
        2.11 统计分析
    3 结果
        3.1 生物学预测并证实MCPIP1与miR-421 有共同的3?-UTR靶点
        3.2 MiR-421 能够负向调控骨肉瘤MG63 细胞和U2OS细胞中MCPIP1 的表达
        3.3 MiR-421 可以通过负向调控MCPIP1 蛋白促进骨肉瘤细胞的增殖、迁移和促炎因子的释放
        3.4 MiR-421 可以通过调控MCPIP1 蛋白促进裸鼠骨肉瘤模型的疾病发展
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
本研究的局限性
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]Interferon-α enhances sensitivity of human osteosarcoma U2OS cells to doxorubicin by p53-dependent apoptosis[J]. Xiang-wei YUAN~2,Xiao-feng ZHU~(3,5),Xiu-fang HUANG~4,Pu-yi SHENG~2,Ai-shan HE~2,Zi-bo YANG~2,Rong DENG~3,Gong-kanFENG~3,Wei-ming LIAO~(2,5)~2 Department of Orthopedic Surgery,The First Affiliated Hospital,Sun Yat-sen University,Guangzhou 510080,China;~3 State Key Laboratoryof Oncology in South China,Cancer Center,Sun Yat-sen University,Guangzhou 510060,China;~4 Department of Pathology,The AffiliatedJiangmen Hospital,Sun Yat-sen University,Jiangmen 529030,China.  Acta Pharmacologica Sinica. 2007(11)



本文编号：3035289