艾拉光动力联合丹参对增生性瘢痕疗效及机制的研究

发布时间：2017-04-13 21:37

  本文关键词：艾拉光动力联合丹参对增生性瘢痕疗效及机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的:观察艾拉光动力(5-Aminolevulinic acid photodynamic therapy,ALA-PDT)联合丹参对于增生性瘢痕(Hyperplastic scar)来源的成纤维细胞(Fibroblast,FB)以及血管内皮细胞(Vascular endothelial cell,VEC)的影响,以探讨艾拉光动力联合丹参对增生性瘢痕的疗效及机制。研究方法:1、收集增生性瘢痕的临床标本:本次实验研究所用标本取自云南省第一人民医院皮肤科符合瘢痕临床诊断标准的12例患者切除的瘢痕组织,取瘢痕组织进行HE染色并于显微镜下观察,证实与临床诊断相一致。2、分离、培养增生性瘢痕来源的FB和VEC,选取生长状态较好的同代对数期FB和VEC用于实验研究。3、实验分组:丹参注射液取1.5mg/ml、3mg/ml、6mg/ml、12mg/ml以及24mg/ml五个浓度,激光取5J/cm2,10J/cm2,50J/cm2,100J/cm2,150J/cm2五个照射剂量,5-氨基酮戊酸(5-Aminolevulinic acid,ALA)取0.015mmol/L,0.15mmol/L,1.5mmol/L,15mmol/L,150mmol/L,1500mmol/L六个浓度,分别作用于FB和VEC,在酶联免疫检测仪上选取490nm波长测量各个测量孔的OD值,找到丹参注射液、ALA的最佳作用浓度和激光的最佳照射剂量。在最佳药物浓度联合最佳激光照射剂量作用于FB和VEC,通过倒置显微镜观察细胞形态,在酶联免疫检测仪选取490nm波长测量各个测量孔的OD值。4、取上清液通过酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定α-SMA、TGF-β1、VEGF的浓度变化。采用蛋白免疫印迹(Western Blotting)法检测TGF-β1、α-SMA蛋白含量的变化。5、SPSS19.0统计软件对计量资料进行统计学处理,计量资料用均数±标准差(x±s)表示,均以P0.05为具有统计学意义。结果:丹参注射液抑制增生性瘢痕FB增殖的最佳浓度为12mg/ml,抑制增生性瘢痕VEC增殖的最佳浓度为6mg/ml。激光对增生性瘢痕FB和VEC作用的最佳光照剂量均为100J/cm2。ALA对增生性瘢痕FB和VEC作用的最佳药物浓度均为1.5mmol/L。ALA-PDT联合丹参组作用于增生性瘢痕FB的OD490nm值为0.51±0.02,ALA-PDT联合丹参组作用于增生性瘢痕VEC的OD490nm值为0.62±0.02,ALA-PDT联合丹参组对增生性瘢痕FB和VEC的抑制作用均明显高于丹参组、ALA单独处理组和激光单独处理组(P0.01)。丹参组、ALA单独处理组、激光单独处理组和ALA-PDT联合丹参组均能抑制α-SMA、TGF-β1、VEGF的分泌。ALA-PDT联合丹参组α-SMA浓度为19.60±1.68 ng/ml,TGF-β1浓度为13.47±0.25 pg/ml,VEGF浓度为54.63±1.42 pg/ml。ALA-PDT联合丹参组对α-SMA、TGF-β1、VEGF分泌的抑制作用明显高于空白对照组、丹参组、ALA单独处理组和激光单独处理组(P0.01)。丹参组、ALA单独处理组、激光单独处理组和ALA-PDT联合丹参组均能减少α-SMA、TGF-β1蛋白的合成量。在ALA-PDT联合丹参作用下,α-SMA蛋白含量下调81%,TGF-β1蛋白含量下调64%,ALA-PDT联合丹参组α-SMA、TGF-β1蛋白合成量明显低于空白对照组、丹参组、ALA单独处理组和激光单独处理组。结论:1、艾拉光动力联合丹参能够改变体外培养的增生性瘢痕来源的FB的形态,并能抑制FB的增殖,其干预效果有一定的浓度依赖性。2、艾拉光动力联合丹参能够改变体外培养的增生性瘢痕来源的VEC的形态,并能抑制VEC的增殖,其干预效果有一定的浓度依赖性。3、艾拉光动力联合丹参能够抑制α-SMA、TGF-β1、VEGF的分泌。4、艾拉光动力联合丹参能够减少α-SMA和TGF-β1蛋白合成量。5、艾拉光动力联合丹参能够对增生性瘢痕产生较好的疗效。
【关键词】：艾拉光动力 丹参 增生性瘢痕 疗效研究 机制研究
【学位授予单位】：云南中医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R622
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩略词一览表10-11
• 引言11-15
• 第一部分艾拉光动力联合丹参对增生性瘢痕的疗效及机制研究15-49
• 一、实验材料15-17
• 二、实验方法和结果17-43
• 1.目的17
• 2.实验方法17-24
• 3.统计学处理24
• 4.实验结果24-43
• 三、讨论43-48
• 四、结论48-49
• 参考文献49-54
• 第二部分 本课题国内外目前研究状况(文献综述)54-60
• 参考文献58-60
• 附录60-65
• 攻读学位期间论文发表及参与课题情况65-66
• 致谢66-67
• 附件67-72

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本文编号：304506