A型肉毒毒素影响透明质酸钠凝胶代谢的实验研究
发布时间：2021-02-23 14:01
背景:A型肉毒毒素（Botulinum toxin type A,BTX-A）和透明质酸钠（Hyaluronic acid,HA）凝胶联合注射治疗面部年轻化的疗效较单独注射HA凝胶更好,同时发现,BTX-A能明显降低体内HA凝胶的代谢率,具有显著协同作用,但目前国内外并无相关文献报道BTX-A降低HA凝胶代谢的相关机制,另外,在临床操作中,因HA填充剂量过大、填充物移位、血管栓塞、皮肤组织坏死、失明等并发症的发生率较高,需及时注射透明质酸酶（Hyaluronidase,HAase）进行溶解,但目前尚无BTX-A对HAase活性影响的相关文献报道。目的:本实验拟初步研究BTX-A对体外HA凝胶酶降解反应的影响,并在大鼠体内观察BTX-A对HA凝胶代谢的影响,进而探讨二者联合治疗协同作用的发生机制,为临床操作提供实验依据。方法:1、BTX-A对体外HA凝胶酶解反应的影响取海薇和润百颜HA凝胶各5份,每份0.05m L,经2%甲苯胺蓝染色12h,室温（25℃）复温1h后,分别加入BTX-A 2.5U（2.5U/m L）、5.0U（5.0U/m L）、10.0U（10.0U/m L）、20.0...
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
wistar大鼠背部注射区域标记图
8a后，经脱臼法处死，尸体经兰州大学第二医院动物实验中心统一处理（图2-2）。图2-2皮肤组织及剩余HA凝胶取材示意图Figure2-2SchematicdrawingofskintissuesandremainingHAgela大鼠背部皮肤组织及剩余HA凝胶取材（90d）；b完整游离的剩余HA凝胶（90d）剪开皮肤组织，见HA凝胶形成完整包膜并固定于真皮下层，活动度较小，富有弹性，从真皮组织下层可完整剥离。注射后第90d，对照组（右）剩余HA凝胶体积较BTX-A组（左）明显减少。aSkintissueandremainingHAgelintheratback(90d);bFreeremainingHAgel(90d)Aftercuttingtheskintissue,itcanbeseenthattheHAgelformsacompleteenvelopeandisfixedtothelowerlayerofthedermis,withlessmobilityandrichelasticity.Itcanbecompletelyreleasedfromthelowerlayerofdermaltissue.Onthe90thdayafterinjection,thevolumeoftheremainingHAgelonthecontrolgroup,wassignificantlyreducedcomparedtotheBTX-Agroup.2.5.2.5检测指标及方法1.一般情况大鼠经常规饲养7d，观察大鼠日常行为习惯和进食水等有无异常，注射后动态观察上述行为是否发生改变，观察背部注射区域皮肤隆起情况，观察局部毛发生长情况，有无皮肤破溃、水肿、红斑等不良反应发生。2.免疫组化染色检测HYAL-1、HYAL-2的表达在各实验周期对大鼠背部注射区域皮肤组织进行取材，制作石蜡切片行免疫组化染色。具体步骤如下：①石蜡切片经脱蜡至水：依次将切片浸入二甲苯I（30min）→二甲苯II（30min）→无水乙醇I（15min）→无水乙醇II（15min）→95%乙醇I（5min）95%乙醇II（5min）→80%乙醇（5min）→75%乙醇（5min）；蒸馏水冲洗2次，PBS（PH7.4）冲洗3遍，每遍3min。LRb
13第三章实验结果3.1BTX-A对体外HA凝胶酶解反应的影响通过肉眼及显微镜（40×）观察，海薇及润百颜两种产品形态学差异较大，在水溶液中润百颜产品分布较海薇分散，其颗粒尺寸也较海薇大（润百颜：130.0-1400.0μm，海薇：100.0-800.0μm，图3-1）。图3-12%甲苯胺蓝溶液染色后肉眼及显微镜下观察Figure3-1Visualandmicroscopicobservationafter2%toluidinebluestaininga润百颜；b海薇；c润百颜（40×）；d海薇（40×）aBiohyalux;bMatrifill;c40×,Biohyalux;d40×,Matrifill.在0U、2.5U、5.0U、10.0U、20.0UBTX-A作用下，润百颜产品分别在60min、70min、80min、100min、100min达到最大酶解状态，酶解率分别为72.149%、68.791%、64.683%、58.599%、58.334%（图3-2、表3-1）。当BTX-A剂量分别为5.0U、10.0U、20.0U时，在10min后润百颜HA凝胶的酶解速率较对照组（0UBTX-A）减小（P<0.05）；20min后，2.5U实验组也较对照组的酶解速率减小（P<0.05）；10.0U、20.0U实验组与其他实验组比较，在40min后酶解速率也显著减小（P<0.001）。cdab
【参考文献】：
期刊论文
[1]六种注射用交联透明质酸钠的形态学观察及体外酶降解实验[J]. 王慕瑶,蒋伊晨,吴可伦,谢利,王杭. 中国美容医学. 2017(04)
[2]肉毒毒素A对大鼠慢性神经源性疼痛中P物质和炎性反应的影响[J]. 陈彦强,王永平,杨同群,周斌,张海鸿. 基础医学与临床. 2016(11)
[3]医用含聚乙烯醇凝胶微球的透明质酸钠-羟丙基甲基纤维素凝胶在矫正眉间川字纹中的应用分析[J]. 肖明明,王杭,王鹏,王志军. 中国美容医学. 2016(03)
[4]透明质酸的结构、性能、改性和应用研究进展[J]. 张堃,简军,张政朴. 高分子通报. 2015(09)
硕士论文
[1]肉毒毒素与透明质酸联合治疗的安全性研究以及对真皮层胶原含量的影响[D]. 陈兵.北京协和医学院 2011
[2]A型肉毒毒素局部注射对大鼠胸舌骨肌作用的酶组织化学研究[D]. 王静.四川大学 2006
本文编号：3047705
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
wistar大鼠背部注射区域标记图
8a后，经脱臼法处死，尸体经兰州大学第二医院动物实验中心统一处理（图2-2）。图2-2皮肤组织及剩余HA凝胶取材示意图Figure2-2SchematicdrawingofskintissuesandremainingHAgela大鼠背部皮肤组织及剩余HA凝胶取材（90d）；b完整游离的剩余HA凝胶（90d）剪开皮肤组织，见HA凝胶形成完整包膜并固定于真皮下层，活动度较小，富有弹性，从真皮组织下层可完整剥离。注射后第90d，对照组（右）剩余HA凝胶体积较BTX-A组（左）明显减少。aSkintissueandremainingHAgelintheratback(90d);bFreeremainingHAgel(90d)Aftercuttingtheskintissue,itcanbeseenthattheHAgelformsacompleteenvelopeandisfixedtothelowerlayerofthedermis,withlessmobilityandrichelasticity.Itcanbecompletelyreleasedfromthelowerlayerofdermaltissue.Onthe90thdayafterinjection,thevolumeoftheremainingHAgelonthecontrolgroup,wassignificantlyreducedcomparedtotheBTX-Agroup.2.5.2.5检测指标及方法1.一般情况大鼠经常规饲养7d，观察大鼠日常行为习惯和进食水等有无异常，注射后动态观察上述行为是否发生改变，观察背部注射区域皮肤隆起情况，观察局部毛发生长情况，有无皮肤破溃、水肿、红斑等不良反应发生。2.免疫组化染色检测HYAL-1、HYAL-2的表达在各实验周期对大鼠背部注射区域皮肤组织进行取材，制作石蜡切片行免疫组化染色。具体步骤如下：①石蜡切片经脱蜡至水：依次将切片浸入二甲苯I（30min）→二甲苯II（30min）→无水乙醇I（15min）→无水乙醇II（15min）→95%乙醇I（5min）95%乙醇II（5min）→80%乙醇（5min）→75%乙醇（5min）；蒸馏水冲洗2次，PBS（PH7.4）冲洗3遍，每遍3min。LRb
13第三章实验结果3.1BTX-A对体外HA凝胶酶解反应的影响通过肉眼及显微镜（40×）观察，海薇及润百颜两种产品形态学差异较大，在水溶液中润百颜产品分布较海薇分散，其颗粒尺寸也较海薇大（润百颜：130.0-1400.0μm，海薇：100.0-800.0μm，图3-1）。图3-12%甲苯胺蓝溶液染色后肉眼及显微镜下观察Figure3-1Visualandmicroscopicobservationafter2%toluidinebluestaininga润百颜；b海薇；c润百颜（40×）；d海薇（40×）aBiohyalux;bMatrifill;c40×,Biohyalux;d40×,Matrifill.在0U、2.5U、5.0U、10.0U、20.0UBTX-A作用下，润百颜产品分别在60min、70min、80min、100min、100min达到最大酶解状态，酶解率分别为72.149%、68.791%、64.683%、58.599%、58.334%（图3-2、表3-1）。当BTX-A剂量分别为5.0U、10.0U、20.0U时，在10min后润百颜HA凝胶的酶解速率较对照组（0UBTX-A）减小（P<0.05）；20min后，2.5U实验组也较对照组的酶解速率减小（P<0.05）；10.0U、20.0U实验组与其他实验组比较，在40min后酶解速率也显著减小（P<0.001）。cdab
【参考文献】：
期刊论文
[1]六种注射用交联透明质酸钠的形态学观察及体外酶降解实验[J]. 王慕瑶,蒋伊晨,吴可伦,谢利,王杭. 中国美容医学. 2017(04)
[2]肉毒毒素A对大鼠慢性神经源性疼痛中P物质和炎性反应的影响[J]. 陈彦强,王永平,杨同群,周斌,张海鸿. 基础医学与临床. 2016(11)
[3]医用含聚乙烯醇凝胶微球的透明质酸钠-羟丙基甲基纤维素凝胶在矫正眉间川字纹中的应用分析[J]. 肖明明,王杭,王鹏,王志军. 中国美容医学. 2016(03)
[4]透明质酸的结构、性能、改性和应用研究进展[J]. 张堃,简军,张政朴. 高分子通报. 2015(09)
硕士论文
[1]肉毒毒素与透明质酸联合治疗的安全性研究以及对真皮层胶原含量的影响[D]. 陈兵.北京协和医学院 2011
[2]A型肉毒毒素局部注射对大鼠胸舌骨肌作用的酶组织化学研究[D]. 王静.四川大学 2006
本文编号：3047705
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