沉默Aurora-B通过PI3K/Akt/NF-κB信号通路抑制骨肉瘤细胞侵袭和迁移的体外研究

发布时间：2021-02-25 14:43

　　目的:本研究旨在体外探讨沉默Aurora-B基因表达通过PI3K/Akt/NF-κB信号通路对人骨肉瘤细胞的侵袭和迁移的影响。方法:构建干扰Aurora-B基因表达的慢病毒载分别命名为LV-shAURKB（LV-shAURKB-1、LV-shAURKB-2、LV-shAURKB-3）和阴性对照载体LV-NC。分别转染人骨肉瘤细胞株U2-OS细胞和HOS细胞。qRT-PCR检测Aurora-B基因的mRNA水平。Transwell侵袭实验和划痕愈合实验检测U2-OS细胞和HOS细胞侵袭和迁移情况。采用免疫组化方法研究24例伴有肺转移的骨肉瘤标本中Aurora-B和p-Akt（Ser473）蛋白的表达情况,并分析它们的相关性。Western Blot检测转染LV-shAURKB后Aurora-B、p-Akt（Ser473）、Akt、p-PI3K（Tyr199）、PI3K、NF-κB（p65）、β-actin蛋白表达水平。结果:①qRT-PCR和Western Blot实验结果显示与对经转染阴照载体组对比,转染了LV-shAURKB组骨肉瘤细胞的Aurora-B的mRNA和蛋白水平明显降低;... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
中英文缩略词表
第1章 前言
第2章 材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞来源
        2.1.2 慢病毒载体来源
        2.1.3 主要试剂与材料
    2.2 主要软件
    2.3 主要仪器
    2.4 常用试剂的配置
    2.5 免疫组化
    2.6 慢病毒shRNA重组表达载体的构建与测序
    2.7 细胞复苏、培养传代、冻存、转染
    2.8 Western Blot法分析U2-OS细胞和HOS细胞Aurora-B、PI3K、p-PI3K（Tyr199）、Akt、p-Akt（Ser473）、NF-κB（p65）的表达
    2.9 qRT-PCR法分析各组人U2-OS细胞和HOS细胞内Aurora-B的表达
    2.10 划痕愈合实验
    2.11 Transwell侵袭实验
    2.12 统计学方法
第3章 结果
    3.1 shAURKB干扰载体测序结果
    3.2 LV-shAURKB慢病毒载体转染抑制骨肉瘤细胞Aurora-B的表达
    3.3 沉默Aurora-B的表达水平能够抑制骨肉瘤细胞株U2-OS细胞和HOS细胞的侵袭能力
    3.4 沉默Aurora-B的表达水平能够抑制骨肉瘤细胞株U2-OS细胞和HOS细胞的迁移能力
    3.5 骨肉瘤组织标本中Aurora-B和p-Akt（Ser473）的相关性
    3.6 沉默Aurora-B对PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关蛋白的影响
第4章 讨论
第5章 结论与展望
致谢
参考文献
附图
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]Aurora-B激酶及其抑制剂研究进展[J]. 董丹丹,肖燕燕,刘伟,周红刚,杨诚.  药学学报. 2013(04)
[2]Aurora-B、Ki-67在骨肉瘤中的表达及与远处转移的关系[J]. 刘志礼,尹庆水,舒勇,黄山虎,罗赟,周扬,王高,邹平安.  解放军医学杂志. 2011(11)
[3]慢病毒载体介导RNAi的研究进展[J]. 李英明,陈燕慧.  生物技术通报. 2009(07)



本文编号：3051121