沉默COPB2基因对人三阴乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响
发布时间：2021-02-27 18:22
目的三阴乳腺癌侵袭性强,淋巴结转移率高,五年复发率高,预后较差,缺乏相应治疗靶点。近年来沉默肿瘤特异性基因的表达或研发针对肿瘤特异性基因的药物,成为肿瘤基因治疗的新方向。衣被蛋白复合体-亚基β2（coatomer protein complex,subunie beta 2,beta prime,COPB2）,在细胞内物质转运中发挥着重要作用。研究发现,COPB2基因在癌组织中高表达,沉默COPB2基因可致细胞周期阻滞、抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡。本实验的目的是研究COPB2对三阴乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其初步机制探讨。方法1.Western blotting检测非三阴乳腺癌MCF-7细胞和三阴乳腺癌HS-578T细胞中COPB2的表达;两种细胞上皮间质转化标志物表皮钙粘蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、N-钙粘蛋白（N-cadherin）的表达差异。2.MTT实验、克隆形成实验、Transwell实验检测非三阴乳腺癌MCF-7细胞和三阴乳腺癌HS-578T细胞增殖、迁移、侵袭能力的差异。3.COPB2基因的慢病毒特异性干扰载体sh-COPB2转染人...
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：42 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
COPB2在乳腺癌中的表达水平（A）TCGA分析COPB2mRNA在乳腺癌组织及其癌旁组织中的表达（t-test，***P<0.001）
兰州大学硕士学位论文沉默COPB2基因对人三阴乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响18图2HS-578T和MCF-7细胞的生物学特点（A）MTT实验检测24h、48h、72h、96h和120h时，MCF-7、HS-578T细胞的增殖能力（n=3，t-test，*P<0.05，***P<0.001）。（B）克隆形成实验检测MCF-7、HS-578T细胞的克隆形成能力，右侧柱状图为三次独立重复实验定量分析（n=3，t-test，***P<0.001）。（C）Transwell迁移实验检测MCF-7、HS-578T细胞的迁移能力（×200），右侧柱状图为三次独立重复实验定量分析（n=3，t-test，***P<0.001）。（D）Transwell侵袭实验检测MCF-7、HS-578T细胞的侵袭能力（×200），右侧柱状图为三次独立重复实验定量分析（n=3，t-test，**P<0.01）。（E）WesternBlotting检测MCF-7和HS-578T中E-Ca、Vimentin、N-Ca蛋白表达水平，右侧柱状图为三次独立重复实验定量分析（n=3，t-test，***P<0.001）。3慢病毒介导的shRNA沉默HS-578T细胞中的COPB23.1荧光显微镜观察HS-578T细胞感染效率HS-578T细胞的增殖、侵袭和迁移能力都强于MCF-7细胞，且HS-578T细胞中COPB2表达高于MCF-7细胞，为进一步研究COPB2与细胞增殖、侵袭和迁移能力的关系，本实验选择HS-578T细胞为研究对象。慢病毒包装的COPB2shRNA感染HS-578T细胞96h后，荧光显微镜下观察感染情况，转染效率大于80%，达到预期感染效果(图3A)。3.2Westernblotting检测慢病毒感染细胞后COPB2的表达情况慢病毒感染HS-578T细胞96h后，Westernblotting检测COPB2的表达情况。结果显示，慢病毒感染以后，与Parental组相比，sh-COPB2组中COPB2蛋白水平显著下降(P<0.01)，与sh-Control组相比，sh-COPB2组中COPB2蛋白水平显著下降(P<0.05)(图3B)。结果提示，慢病毒介导的shRNA能够有效沉默HS-578T细胞中COPB2的表达?
兰州大学硕士学位论文沉默COPB2基因对人三阴乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响19图3慢病毒介导的shRNA沉默HS-578T细胞中的COPB2（A）荧光显微镜观察HS-578T细胞中慢病毒感染效率大于80%。（B）WesternBlotting检测慢病毒感染后HS-578T细胞COPB2蛋白表达水平，右侧柱状图为三次独立重复实验定量分析（n=3，t-test，*P<0.05，**P<0.01以Parental组为标准化成1.0进行定量分析）。4COPB2基因沉默对HS-578T细胞增殖的影响4.1MTT实验检测HS-578T细胞增殖能力慢病毒转染后，MTT实验检测24h、48h、72h、96h、120h细胞的增殖能力。结果显示，与Parental组及sh-Control组相比，48h、72h、96h、120h时，sh-COPB2组细胞增殖能力明显降低(P<0.05，P<0.001)(图4A)。4.2HS-578T细胞克隆形成能力慢病毒转染后，克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力，显微镜下计数克隆球，结果显示，与亲本细胞组及空质粒对照组相比，沉默组克隆形成能力明显降低(P<0.001)(图4B)。Parentalsh-Controlsh-COPB2COPB2GAPDH
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国城市癌症早诊早治项目进展[J]. 陈万青,李霓,石菊芳,任建松,陈宏达,李江,代敏,赫捷. 中国肿瘤. 2019(01)
[2]EpCAM,Vimentin和N-Cadherin在三阴型乳腺癌中的表达和预后意义[J]. 李新军,马风妹,付丽梅,付明霞,吴戈. 现代生物医学进展. 2017(04)
[3]乳腺癌手术治疗回顾和进展[J]. 张彦收,刘运江. 现代肿瘤医学. 2015(05)
[4]Akt/PKB信号通路调控机制的研究进展[J]. 赵学芹,黄宪章. 广东医学. 2009(12)
[5]N-cadherin knock-down decreases invasiveness of esophageal squamous cell carcinoma in vitro[J]. Ke Li,Wei He,Na Lin,Xin Wang,Qing-Xia Fan,Department of Oncology,the First Affiliated Hospital,Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,Henan Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2009(06)
博士论文
[1]COPB2基因沉默通过JNK/c-Jun信号通路抑制结直肠癌细胞增殖、诱导凋亡并提高细胞对常山酮的敏感性[D]. 王燕.兰州大学 2018
本文编号：3054621
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：42 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
COPB2在乳腺癌中的表达水平（A）TCGA分析COPB2mRNA在乳腺癌组织及其癌旁组织中的表达（t-test，***P<0.001）
兰州大学硕士学位论文沉默COPB2基因对人三阴乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响18图2HS-578T和MCF-7细胞的生物学特点（A）MTT实验检测24h、48h、72h、96h和120h时，MCF-7、HS-578T细胞的增殖能力（n=3，t-test，*P<0.05，***P<0.001）。（B）克隆形成实验检测MCF-7、HS-578T细胞的克隆形成能力，右侧柱状图为三次独立重复实验定量分析（n=3，t-test，***P<0.001）。（C）Transwell迁移实验检测MCF-7、HS-578T细胞的迁移能力（×200），右侧柱状图为三次独立重复实验定量分析（n=3，t-test，***P<0.001）。（D）Transwell侵袭实验检测MCF-7、HS-578T细胞的侵袭能力（×200），右侧柱状图为三次独立重复实验定量分析（n=3，t-test，**P<0.01）。（E）WesternBlotting检测MCF-7和HS-578T中E-Ca、Vimentin、N-Ca蛋白表达水平，右侧柱状图为三次独立重复实验定量分析（n=3，t-test，***P<0.001）。3慢病毒介导的shRNA沉默HS-578T细胞中的COPB23.1荧光显微镜观察HS-578T细胞感染效率HS-578T细胞的增殖、侵袭和迁移能力都强于MCF-7细胞，且HS-578T细胞中COPB2表达高于MCF-7细胞，为进一步研究COPB2与细胞增殖、侵袭和迁移能力的关系，本实验选择HS-578T细胞为研究对象。慢病毒包装的COPB2shRNA感染HS-578T细胞96h后，荧光显微镜下观察感染情况，转染效率大于80%，达到预期感染效果(图3A)。3.2Westernblotting检测慢病毒感染细胞后COPB2的表达情况慢病毒感染HS-578T细胞96h后，Westernblotting检测COPB2的表达情况。结果显示，慢病毒感染以后，与Parental组相比，sh-COPB2组中COPB2蛋白水平显著下降(P<0.01)，与sh-Control组相比，sh-COPB2组中COPB2蛋白水平显著下降(P<0.05)(图3B)。结果提示，慢病毒介导的shRNA能够有效沉默HS-578T细胞中COPB2的表达?
兰州大学硕士学位论文沉默COPB2基因对人三阴乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响19图3慢病毒介导的shRNA沉默HS-578T细胞中的COPB2（A）荧光显微镜观察HS-578T细胞中慢病毒感染效率大于80%。（B）WesternBlotting检测慢病毒感染后HS-578T细胞COPB2蛋白表达水平，右侧柱状图为三次独立重复实验定量分析（n=3，t-test，*P<0.05，**P<0.01以Parental组为标准化成1.0进行定量分析）。4COPB2基因沉默对HS-578T细胞增殖的影响4.1MTT实验检测HS-578T细胞增殖能力慢病毒转染后，MTT实验检测24h、48h、72h、96h、120h细胞的增殖能力。结果显示，与Parental组及sh-Control组相比，48h、72h、96h、120h时，sh-COPB2组细胞增殖能力明显降低(P<0.05，P<0.001)(图4A)。4.2HS-578T细胞克隆形成能力慢病毒转染后，克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力，显微镜下计数克隆球，结果显示，与亲本细胞组及空质粒对照组相比，沉默组克隆形成能力明显降低(P<0.001)(图4B)。Parentalsh-Controlsh-COPB2COPB2GAPDH
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国城市癌症早诊早治项目进展[J]. 陈万青,李霓,石菊芳,任建松,陈宏达,李江,代敏,赫捷. 中国肿瘤. 2019(01)
[2]EpCAM,Vimentin和N-Cadherin在三阴型乳腺癌中的表达和预后意义[J]. 李新军,马风妹,付丽梅,付明霞,吴戈. 现代生物医学进展. 2017(04)
[3]乳腺癌手术治疗回顾和进展[J]. 张彦收,刘运江. 现代肿瘤医学. 2015(05)
[4]Akt/PKB信号通路调控机制的研究进展[J]. 赵学芹,黄宪章. 广东医学. 2009(12)
[5]N-cadherin knock-down decreases invasiveness of esophageal squamous cell carcinoma in vitro[J]. Ke Li,Wei He,Na Lin,Xin Wang,Qing-Xia Fan,Department of Oncology,the First Affiliated Hospital,Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,Henan Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2009(06)
博士论文
[1]COPB2基因沉默通过JNK/c-Jun信号通路抑制结直肠癌细胞增殖、诱导凋亡并提高细胞对常山酮的敏感性[D]. 王燕.兰州大学 2018
本文编号：3054621
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