SUMO化修饰Spastin调控海马神经元树突棘成熟的机制研究
发布时间：2021-03-11 03:09
目的及意义脊髓损伤后神经突触可塑性的变化（树突棘密度及成熟度的变化）对脊髓损伤的修复至关重要。树突棘是突触后的结构基础,其形态与突触可塑性密切相关。目前关于Spastin的研究报道主要包括在轴突运输、轴突分支和侧枝形成等方面。SUMO化修饰作用在神经系统及突触形成等方面起重要作用,且本实验室已验证Spastin能被SUMO修饰。然而Spastin以及其SUMO化修饰状态的是否能够调节突触可塑性尚待探讨。本研究主要目的为SUMO化修饰Spastin是如何调控树突的生长调控机制,以及如何调节突触可塑性。探讨Spastin及其SUMO化在树突生长发育的调控机制,不仅有利于认识神经元信息的调控机制,也可让我们深入理解神经疾病及神经损伤的本质过程,为治疗神经发育障碍及神经损伤疾病提供新的理论支持。材料与方法首先采用免疫细胞化学染色,明确Spastin及与SUMO在树突及树突棘中是否存在共定位,进而发挥作用;其次构建了Spastin及其SUMO化相关表达载体,并过表达于体外培养的海马神经元中,观察SUMO化修饰调控Spastin在神经元树突伸长、分支形成及树突棘发育中发挥的作用,观察神经元细胞膜表...
【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SUMO化修饰Spastin或去SUMO化修饰Spastin对树突生长的影响
实验结果暨南大学硕士学位论文26图3.3SUMOylatedSpastin或deSUMOylatedSpastin对树突棘形态的影响。（A）用Spastin或SUMO1转染DIV10海马神经元以研究SUMO化Spastin对树突棘的影响。在DIV14处投射Z-堆叠共聚焦图像，并且显示了海马神经元和代表性树突片段的代表性图像。（B）用Spastin及其deSUMOylation突变体转染DIV10海马神经元，以研究deSUMOylatedSpastin对树突棘的影响。（C）用Spastin或SENP1转染DIV10海马神经元以研究deSUMOylatedSpastin对树突棘的影响。测量树突棘密度，树突棘的形状类型和形状类型的脊柱百分比，并且值表示为来自三个独立实验的平均值±SD。*与NC相比P<0.05;与指示的对照相比，＃P<0.05。比例尺，50μm，10μm（放大）。Figure3.3EffectsonthemorphologyofdendriticspinebySUMOylatedSpastinordeSUMOylatedSpastin.(A)DIV10hippocampalneuronsweretransfectedwithSpastinorSUMO1toinvestigatetheeffectofSUMOylatedSpastinondendriticspine.Z-stackconfocalimageswereprojectedatDIV14andrepresentativeimagesofhippocampalneuronsandrepresentativedendriticsegmentswereshown.(B)DIV10hippocampalneuronsweretransfectedwithSpastinanditsdeSUMOylationmutanttoinvestigatetheeffectofdeSUMOylatedSpastinondendriticspine.(C)DIV10hippocampalneuronsweretransfectedwithSpastinorSENP1toinvestigatetheeffectofdeSUMOylatedSpastinondendriticspine.Thedendriticspinedensity,theshapetypeofdendriticspineandthespinepercentagebyshapetypeweremeasuredandvaluewererepresentedasthemean±SDfromthreeindependentexperiments.*P<0.05versusNC;#P<0.05versusindicatedcontrol.Scalebar,50μm，10μm（Enlarg
实验结果暨南大学硕士学位论文28图3.4SUMO化Spastin或deSUMOylatedSpastin对表面GluA1表达的影响。（A）用Spastin和SUMO1转染DIV10海马神经元并在DIV14固定。通过抗GluA1检测表面GluA1信号。使用共聚焦获得图像，在实验中应用于所有样品的相同设置，显示代表性图像。（B）用deSUMO化Spastin突变体Spastin-K427R转染DIV10海马神经元并在DIV14固定。通过抗GluA1检测表面GluA1信号。定量GluA1信号的荧光强度。将值测量为来自三个独立实验的平均值±SD。*与NC相比P<0.05;与指示的对照相比，＃P<0.05。比例尺，5μm。Figure3.4EffectsontheexpressionofsurfaceGluA1levelsbySUMOylatedSpastinordeSUMOylatedSpastin.(A)DIV10hippocampalneuronsweretransfectedwithSpastinandSUMO1andfixedatDIV14.SurfaceGluA1signalsweredetectedbyanti-GluA1.Imageswereacquiredwithconfocalwithidenticalsettingsappliedtoallsamplesinanexperiment,representativeimageswereshown.(B)DIV10hippocampalneuronsweretransfectedwithdeSUMOylatedSpastinmutantSpastin-K427RandfixedatDIV14.SurfaceGluA1signalsweredetectedbyanti-GluA1.FluorescenceintensityofGluA1signalswerequantified.Valuesweremeasuredasthemean±SDfromthreeindependentexperiments.*P<0.05versusNC;#P<0.05versusindicatedcontrol.Scalebar,5μm.3.5Spastin的SUMO化是怎样调节GluA1的转运为了进一步证实Spastin及其不同SUMO状态对GluA1膜转运的影响及GluA1的转运途径具体细胞内机制，我们通过追踪已公认的早期内吞体、循环内
本文编号：3075756
【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SUMO化修饰Spastin或去SUMO化修饰Spastin对树突生长的影响
实验结果暨南大学硕士学位论文26图3.3SUMOylatedSpastin或deSUMOylatedSpastin对树突棘形态的影响。（A）用Spastin或SUMO1转染DIV10海马神经元以研究SUMO化Spastin对树突棘的影响。在DIV14处投射Z-堆叠共聚焦图像，并且显示了海马神经元和代表性树突片段的代表性图像。（B）用Spastin及其deSUMOylation突变体转染DIV10海马神经元，以研究deSUMOylatedSpastin对树突棘的影响。（C）用Spastin或SENP1转染DIV10海马神经元以研究deSUMOylatedSpastin对树突棘的影响。测量树突棘密度，树突棘的形状类型和形状类型的脊柱百分比，并且值表示为来自三个独立实验的平均值±SD。*与NC相比P<0.05;与指示的对照相比，＃P<0.05。比例尺，50μm，10μm（放大）。Figure3.3EffectsonthemorphologyofdendriticspinebySUMOylatedSpastinordeSUMOylatedSpastin.(A)DIV10hippocampalneuronsweretransfectedwithSpastinorSUMO1toinvestigatetheeffectofSUMOylatedSpastinondendriticspine.Z-stackconfocalimageswereprojectedatDIV14andrepresentativeimagesofhippocampalneuronsandrepresentativedendriticsegmentswereshown.(B)DIV10hippocampalneuronsweretransfectedwithSpastinanditsdeSUMOylationmutanttoinvestigatetheeffectofdeSUMOylatedSpastinondendriticspine.(C)DIV10hippocampalneuronsweretransfectedwithSpastinorSENP1toinvestigatetheeffectofdeSUMOylatedSpastinondendriticspine.Thedendriticspinedensity,theshapetypeofdendriticspineandthespinepercentagebyshapetypeweremeasuredandvaluewererepresentedasthemean±SDfromthreeindependentexperiments.*P<0.05versusNC;#P<0.05versusindicatedcontrol.Scalebar,50μm，10μm（Enlarg
实验结果暨南大学硕士学位论文28图3.4SUMO化Spastin或deSUMOylatedSpastin对表面GluA1表达的影响。（A）用Spastin和SUMO1转染DIV10海马神经元并在DIV14固定。通过抗GluA1检测表面GluA1信号。使用共聚焦获得图像，在实验中应用于所有样品的相同设置，显示代表性图像。（B）用deSUMO化Spastin突变体Spastin-K427R转染DIV10海马神经元并在DIV14固定。通过抗GluA1检测表面GluA1信号。定量GluA1信号的荧光强度。将值测量为来自三个独立实验的平均值±SD。*与NC相比P<0.05;与指示的对照相比，＃P<0.05。比例尺，5μm。Figure3.4EffectsontheexpressionofsurfaceGluA1levelsbySUMOylatedSpastinordeSUMOylatedSpastin.(A)DIV10hippocampalneuronsweretransfectedwithSpastinandSUMO1andfixedatDIV14.SurfaceGluA1signalsweredetectedbyanti-GluA1.Imageswereacquiredwithconfocalwithidenticalsettingsappliedtoallsamplesinanexperiment,representativeimageswereshown.(B)DIV10hippocampalneuronsweretransfectedwithdeSUMOylatedSpastinmutantSpastin-K427RandfixedatDIV14.SurfaceGluA1signalsweredetectedbyanti-GluA1.FluorescenceintensityofGluA1signalswerequantified.Valuesweremeasuredasthemean±SDfromthreeindependentexperiments.*P<0.05versusNC;#P<0.05versusindicatedcontrol.Scalebar,5μm.3.5Spastin的SUMO化是怎样调节GluA1的转运为了进一步证实Spastin及其不同SUMO状态对GluA1膜转运的影响及GluA1的转运途径具体细胞内机制，我们通过追踪已公认的早期内吞体、循环内
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