糖皮质激素与富血小板血浆联合序贯治疗肌腱病的研究
发布时间：2021-03-11 12:21
背景:肌腱病是骨科临床诊疗中常见的疼痛性和退变性疾病,目前常用的治疗方法有抑制炎症的糖皮质激素（GC s）注射和促进修复的自体富血小板血浆（PRP）注射,然而,激素注射容易导致肌腱退变断裂,而PRP疗效报道不一致。我们提出假设:针对炎症型肌腱病需要抗炎和修复的“序贯疗法”,即先糖皮质激素处理调控肌腱病的炎症病理微环境,然后再用PRP处理启动退变基质的修复再生。我们在研究中将比较糖皮质激素与PRP“序贯治疗”与单独PRP治疗方案在早期炎症型肌腱病模型中的治疗效果。方法:采集新西兰兔肌腱组织,用酶消化法提取肌腱干细胞（TSPCs）,于耳中动脉采集血液通过梯度离心法制备PRP。TSPCs分别在普通完全培养基以及添加10%PRP的完全培养基中培养后进行转录组测序,获得PRP处理后TSPCs的基因表达谱变化情况。为了探究“序贯疗法”的可行性,TSPCs在经IL-1β诱导炎症后分别添加生理盐水,曲安奈德（TA）,PRP以及序贯添加TA和PRP,最后检测细胞增殖,衰老及凋亡情况。在体内实验中,在跟腱局部注射胶原酶1周后,新西兰兔被分为四组:（1）生理盐水治疗组;（2）TA治疗组;（3）PRP治疗组;...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１体外治疗模塑的处理流．程示意图
浙江大学硕士学位论文?实验结果??２．实验结果??２．１?ＰＲＰ的制备与质量控制??我们的示意图展示了制备实验所用ＰＲＰ的大概流程，通过低速离心看到明显??的白细胞层与红细胞层后去除，上清液再次进行高速离心可以看到沉降的血小板，??少量上清液重悬血小扳沉淀即可得ＰＲＰ。通过检测血小板、白细胞和红细胞的浓??度，对制备的去除白细胞的ＰＲＰ进行了全面的质量控制（图２）。与全血样本相比，??我们的结果显示ＰＲＰ与全血的血小板计数比值约为６．６倍。而ＰＲＰ中的红细胞和??白细胞浓度则显著降低，浓度低于０．１Ｘ１０３个小１。所有这些结果证实了我们的去??除白细胞的ＰＲＰ的制备方法的可靠性。??５．４ｍｌ?ｂｌｏｏｄ?ｉｎ?０，６ｍ！?ＡＣＤ?Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ：２００ｇｘ?１０?ｍｉｎ??ｓｕｐｅｍａｔｅ?—?Ｔｌｉ－?ＪＢｓｕｐｅｒｎａｔｅ?—?Ｐｌａｔｅｌｅｔ??—？?＾?—？??ｚ＿?ｄｆｌＢｆ?－?Ｓ?ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ?■??ｖ?ｗ?■?ｔＬＪｔ??Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ；１８０ｇｘ?１０?ｍｉｎ?Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ：６００ｇｘ?８?ｍｉｎ?Ｌｐ－ＰＲＰ??Ｂ．?？?ＷＢＣ／ＲＢＣ?ｔ?？?Ｂｌｏｏｄ?Ｃ．?Ｐｌａｔｅｌｅｔ?＊?Ｂｌｏｏｄ??■?Ｌｐ－ＰＲＰ?２０００?．?？?Ｌｐ－ＰＲＰ??＝？?８＇?屯?１８００－????？３?６－?？?３?１６００－?＿??ｓ?去?？??ｔ－?２＊?■?ｏ?１２００－?—■?＊Ｔ＂＂??ｆ?〇?？Ｔ?ｔ?Ｗ??ｇ?０?０８－?ｇ?４００．??—０．０６?■?＾?３００－??Ｓ?０．０４．?＾Ｌ．?ｓ?２
浙江大学硕士学位论文?实验结果??：＊？?Ｂｉ?Ｊ３－半乳糖衰老染色显泰每组ＴＳＰＣｓ的衰老，Ｃ．逋过ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ／ＰＩ／Ｈｏｅｃｈｓｔ??３３３４２染色—光观置盛徽镜观睿（ａ－ｅ＞和Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ－ＦＩＴＣ／ＰＩ漉式细＝胞米（ｆ－ｊ）ｆｔ测各組中ＴＳＰＣｓ??的凋亡情况。Ｄ－Ｆ．细胞增殖（ＣＣＫ－８楂测）、衰老和凋亡的统计结果。斑销１尺：２００ｕｍ。数据以??平均数．土标准差最示。．＊Ｐ?＜０?＋?０５。．．??２．４体内肌腱病模型的构建??新西兰兔跟腱接受胶原酶注射１周后对实验兔进行安乐死，收获肌腱样本进行??ＨＥ和Ｍａｓｓｏｎ染色（图５）。在肌腱的组织学切片中观察到明显的肌腱病表现，包??括纤维．断裂、纤维组：纟只紊乱、新生血管生成＿以及．大量的炎症细胞浸＿＿。??Ａ．?ａ．?ｂ，???ｃ．??■■■??图５胶原酶注射肌腱病造模后１周的组织学结果。Ａ．正常肌腱的ＨＥ和Ｍａｓｓｏｎ染色。Ｂ．胶??原酶注射肌腱病造模后的ＨＥ和Ｍａｓｓｏｎ染色。比例尺：５００?ｕｍ?（Ａ．ａ，Ｂ．ａ），２００?ｕｍ?（Ａ．ｂ－ｃ，??Ｂ．ｂ－ｃ?）〇??２．５肌腱病治疗后的磁共振（ＭＲＩ）影像评估??ＭＲＩ影像（图６）可以用来评估肌腱病的修复情况。在跟腱矢状位图像上进行??测量可以发现，肌腱厚度证明了?ＴＡ和ＴＡ＋ＰＲＰ治疗对消除肌腱病肿胀有一定的作??用。但从另一方面来说，单纯的ＴＡ治疗并不能改善ＭＲＩＴ２异常高信号情况。与??ＮＳ组、ＴＡ组和ＰＲＰ组相比，ＴＡ＋ＰＲＰ组Ｔ２高信号区的面积占比和平均信号强度??均较小，表明病变部位的水肿和炎症程度较轻。虽然ＰＲＰ在降低ＭＲＩＴ２异常信??１８??
【参考文献】：
期刊论文
[1]血小板富集血浆治疗肌腱病的研究进展[J]. 郑泽峰,乐辉辉,陈维善,沈炜亮,欧阳宏伟. 浙江大学学报(医学版). 2016 (02)
本文编号：3076449
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１体外治疗模塑的处理流．程示意图
浙江大学硕士学位论文?实验结果??２．实验结果??２．１?ＰＲＰ的制备与质量控制??我们的示意图展示了制备实验所用ＰＲＰ的大概流程，通过低速离心看到明显??的白细胞层与红细胞层后去除，上清液再次进行高速离心可以看到沉降的血小板，??少量上清液重悬血小扳沉淀即可得ＰＲＰ。通过检测血小板、白细胞和红细胞的浓??度，对制备的去除白细胞的ＰＲＰ进行了全面的质量控制（图２）。与全血样本相比，??我们的结果显示ＰＲＰ与全血的血小板计数比值约为６．６倍。而ＰＲＰ中的红细胞和??白细胞浓度则显著降低，浓度低于０．１Ｘ１０３个小１。所有这些结果证实了我们的去??除白细胞的ＰＲＰ的制备方法的可靠性。??５．４ｍｌ?ｂｌｏｏｄ?ｉｎ?０，６ｍ！?ＡＣＤ?Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ：２００ｇｘ?１０?ｍｉｎ??ｓｕｐｅｍａｔｅ?—?Ｔｌｉ－?ＪＢｓｕｐｅｒｎａｔｅ?—?Ｐｌａｔｅｌｅｔ??—？?＾?—？??ｚ＿?ｄｆｌＢｆ?－?Ｓ?ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ?■??ｖ?ｗ?■?ｔＬＪｔ??Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ；１８０ｇｘ?１０?ｍｉｎ?Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ：６００ｇｘ?８?ｍｉｎ?Ｌｐ－ＰＲＰ??Ｂ．?？?ＷＢＣ／ＲＢＣ?ｔ?？?Ｂｌｏｏｄ?Ｃ．?Ｐｌａｔｅｌｅｔ?＊?Ｂｌｏｏｄ??■?Ｌｐ－ＰＲＰ?２０００?．?？?Ｌｐ－ＰＲＰ??＝？?８＇?屯?１８００－????？３?６－?？?３?１６００－?＿??ｓ?去?？??ｔ－?２＊?■?ｏ?１２００－?—■?＊Ｔ＂＂??ｆ?〇?？Ｔ?ｔ?Ｗ??ｇ?０?０８－?ｇ?４００．??—０．０６?■?＾?３００－??Ｓ?０．０４．?＾Ｌ．?ｓ?２
浙江大学硕士学位论文?实验结果??：＊？?Ｂｉ?Ｊ３－半乳糖衰老染色显泰每组ＴＳＰＣｓ的衰老，Ｃ．逋过ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ／ＰＩ／Ｈｏｅｃｈｓｔ??３３３４２染色—光观置盛徽镜观睿（ａ－ｅ＞和Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ－ＦＩＴＣ／ＰＩ漉式细＝胞米（ｆ－ｊ）ｆｔ测各組中ＴＳＰＣｓ??的凋亡情况。Ｄ－Ｆ．细胞增殖（ＣＣＫ－８楂测）、衰老和凋亡的统计结果。斑销１尺：２００ｕｍ。数据以??平均数．土标准差最示。．＊Ｐ?＜０?＋?０５。．．??２．４体内肌腱病模型的构建??新西兰兔跟腱接受胶原酶注射１周后对实验兔进行安乐死，收获肌腱样本进行??ＨＥ和Ｍａｓｓｏｎ染色（图５）。在肌腱的组织学切片中观察到明显的肌腱病表现，包??括纤维．断裂、纤维组：纟只紊乱、新生血管生成＿以及．大量的炎症细胞浸＿＿。??Ａ．?ａ．?ｂ，???ｃ．??■■■??图５胶原酶注射肌腱病造模后１周的组织学结果。Ａ．正常肌腱的ＨＥ和Ｍａｓｓｏｎ染色。Ｂ．胶??原酶注射肌腱病造模后的ＨＥ和Ｍａｓｓｏｎ染色。比例尺：５００?ｕｍ?（Ａ．ａ，Ｂ．ａ），２００?ｕｍ?（Ａ．ｂ－ｃ，??Ｂ．ｂ－ｃ?）〇??２．５肌腱病治疗后的磁共振（ＭＲＩ）影像评估??ＭＲＩ影像（图６）可以用来评估肌腱病的修复情况。在跟腱矢状位图像上进行??测量可以发现，肌腱厚度证明了?ＴＡ和ＴＡ＋ＰＲＰ治疗对消除肌腱病肿胀有一定的作??用。但从另一方面来说，单纯的ＴＡ治疗并不能改善ＭＲＩＴ２异常高信号情况。与??ＮＳ组、ＴＡ组和ＰＲＰ组相比，ＴＡ＋ＰＲＰ组Ｔ２高信号区的面积占比和平均信号强度??均较小，表明病变部位的水肿和炎症程度较轻。虽然ＰＲＰ在降低ＭＲＩＴ２异常信??１８??
【参考文献】：
期刊论文
[1]血小板富集血浆治疗肌腱病的研究进展[J]. 郑泽峰,乐辉辉,陈维善,沈炜亮,欧阳宏伟. 浙江大学学报(医学版). 2016 (02)
本文编号：3076449
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