不同时间点静脉移植嗅鞘细胞修复脊髓损伤的实验研究

发布时间：2021-03-31 12:41

　　目的1:应用荧光量子点标记嗅鞘细胞;2:探讨嗅鞘细胞治疗脊髓损伤的最佳移植时间窗。方法1.用NASH差速贴壁法分离并提纯SD大鼠乳鼠嗅球来源嗅鞘细胞,提取成功后用免疫荧光法鉴定嗅鞘细胞并测定嗅鞘细胞的纯度,用CCK-8试剂盒检测不同代次的细胞生长并绘制细胞生长曲线;2.用荧光量子点标记嗅鞘细胞,用CCK-8试剂盒检测10nm、20nm、30nm、40nm等浓度量子点标记嗅鞘细胞的毒性并绘制细胞生长曲线,相同浓度量子点标记不同密度嗅鞘细胞并观察期标记效率;3.建立大鼠脊髓半切损伤模型,选取建模成功的大鼠模型,在脊髓损伤后1D、3D、7D、10D时间点移植用量子点标记的嗅鞘细胞,在细胞移植后1D灌注固定后取出损伤处的脊髓,用小动物呈像仪检测聚集到损伤处荧光量大小,用免疫荧光法,检测转移到损伤处嗅鞘细胞。结果1.用差速贴壁法提取分离的嗅鞘细胞,显微镜观察呈现出典型的双极、三级嗅鞘细胞形态,并且胞质透光性好,免疫荧光法测定的嗅鞘细胞计算后的纯度大于85%;2.CCk-8法检测不同代次细胞生长并绘制生长曲线,P5代细胞生长状态最好;3:不同浓度量子点转染嗅鞘细胞后,对细胞生长均有抑制作用,量子点... 

【文章来源】：宁夏医科大学宁夏回族自治区

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

SD新生鼠原代分离、培养的嗅

宁夏医科大学硕士学位论文结果21图2：SD新生鼠嗅球来源OECs不同代次细胞的增殖能力的生长曲线1.4荧光量子点转染嗅鞘细胞以及用DIPA转染嗅鞘细胞的结果荧光量子点标记嗅鞘细胞：用绿色荧光光源激发，细胞质呈现出均匀的红色荧光，细胞核无荧光，并且有很高标记率（图1A）；DIPA转染嗅鞘细胞：用青色荧光光源激发，细胞核呈现出蓝色荧光，细胞质无荧光；（图1B）将不同荧光标记的细胞图片整合，细胞核在细胞中央（蓝色荧光），胞质为均匀的红色荧光。（图1C）从而更好的显现出嗅鞘细胞核的形态，以及胞质。ABC图3：图A为用荧光量子点标记的嗅鞘细胞；图B为用DIPA标记的嗅鞘细胞；图C为量子点与DIPA标记整合的图片1.5量子点转染不同密度嗅鞘细胞的转染效果应用相同浓度的量子点转染不同密度的细胞（图4），图A为量子点转染低密度细胞的转染效果，计算标记效率为98％；图B为量子点转染的较高细胞密度的转染效果，其

宁夏医科大学硕士学位论文结果26图7：随着脊髓损伤时间的推移，聚集在损伤处的荧光值逐渐升高，7d移植组时为最大值，随后10d移植组荧光均值小于C组，开始下降。

【参考文献】：
期刊论文
[1]量子点细胞毒性[J]. 韩晓乐,李擎宇,郝浩,刘晨音,胡军成.  湖北科技学院学报(医学版). 2019(04)
[2]细胞示踪技术研究概述[J]. 周陈清,黄浩.  生物学教学. 2019(08)
[3]嗅鞘细胞移植联合跑台训练抑制脊髓损伤大鼠慢性期瘢痕形成的机制[J]. 高月,王立童,田亚茹,杜云霞,姜永梅.  中华实用诊断与治疗杂志. 2018(11)
[4]脊髓损伤与修复研究进展及展望[J]. 黄振晖,刘耀波.  中国药理学与毒理学杂志. 2017(12)
[5]嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的作用机制及临床应用进展[J]. 黄佩琦,赵振宇.  湘南学院学报(医学版). 2018(01)
[6]嗅鞘细胞静脉移植治疗陈旧性脊髓损伤的实验研究[J]. 王强,于霞,焦延超,李军,张文正,刘雨亮.  泰山医学院学报. 2017(01)
[7]嗅鞘细胞移植联合跑步训练对改善脊髓损伤大鼠后肢运动功能的研究[J]. 王放,高中洋,张廷,徐思越,王栋,李浩鹏,贺西京.  中国骨伤. 2016(10)
[8]嗅鞘细胞移植对脊髓损伤大鼠的作用[J]. 巫九官,李艳敏,郑晓晖.  齐鲁医学杂志. 2016(04)
[9]电针联合嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓损伤神经轴突再生及走向的影响[J]. 谭龙旺,秦兆邦,朱峰,杨利学.  中国骨伤. 2015(05)
[10]嗅鞘细胞移植和复方丹参联合治疗脊髓损伤的研究[J]. 钟波,肖红卫,王素伟,张爱莲.  现代医院. 2014(12)



本文编号：3111457