溶血磷脂酸引导脊髓损伤后移植嗅鞘细胞归巢的作用及机制研究
发布时间：2021-04-05 04:03
脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）可导致严重的中枢神经系统功能障碍。嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs）是一种特殊的神经胶质细胞,兼具施旺细胞和星形胶质细胞双重性质,能够分泌多种神经营养因子、促进轴突延伸及抑制胶质瘢痕的形成。因此,OECs移植已成为治疗SCI的潜在策略。尽管大量研究证明移植的OECs能够参与神经系统在细胞和组织水平上的重建,但SCI后移植OECs归巢到受损区域的关键因素仍不清楚。更重要的是,OECs的迁移能力己被证明与其发挥促轴突生长及再髓鞘化功能密切相关。溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）是一种生物活性脂质介质,在调节干细胞迁移,诱导移植细胞定植于损伤中心过程中起重要作用。LPA通过偶联其6种不同的G蛋白偶联受体（LPAR1-6）激活多种信号转导途径,包括小GTP酶Ras和Rho,以及包括MAPKs、PI3K和PKC在内的蛋白激酶。有研究证实LPA可通过ERK1/2信号介导OECs的迁移、增殖和细胞骨架组装。β-catenin是Wnt信号通路的转录共调节因子,可在胚胎发育过程...
【文章来源】：苏州大学江苏省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２?Ａ－Ｂ），具有典型的双极，三极或更不规则的??形状，大约１０?ｄ后相互缠绕交织成网状
在差速贴壁后的第３ｄＯＥＣｓ逐渐从细胞团簇中爬出。Ｂ：?ＯＥＣｓ形态特征出??现双极、三级或多级形态并相互交织成网状。Ｃ－Ｄ：?ＯＥＣｓ免疫荧光染色，ＮＧＦＲｐ７５??（绿色），ＤＡＰＩ（蓝色）。Ｅ：?ｍｅｒｇｅ后图像显示＞９４％的细胞为ＮＧＦＲＰ７５＋，Ｂａｒ＝２５０??（ｉｍ。??为了评估ＯＥＣｓ在体外的定向迁移，我们利用Ｂｏｙｄｅｎ?ｃｈａｍｂｅｒ装置检测ＯＥＣｓ??向不同浓度ＬＰＡ的趋化性迁移，我们发现ＬＰＡ以浓度依赖性方式诱导ＯＥＣｓ定向迁??移，且在５｜ｉＭ时效果最显著（图３Ａ，Ｃ），后续以此浓度进行研究。通过ｑＲＴ－ＰＣＲ进??一步检测ＯＥＣｓ中ＬＰＡ受体的表达，结果显示与ＬＰＡＲ２和ＬＰＡＲ３相比，ＬＰＡＲ１的??表达量最高（图３Ｂ），为ＯＥＣｓ表面最主要的ＬＰＡ受体亚型。??Ａ?．?Ｂ??ｓ?＊?．．?１１＾??ｉｎｎｌｌｌ?ｌ：ＬＬｍ??°?ｉ?＾?￣?？?￣（ＭＭ）?，，／１??Ｃｏｎｔｒｏｌ?０．１?（ｉＭ?ｌ｜ｉＭ?５＾ｉＭ?１０［ｉＭ??图３．?ＬＰＡ诱导ＯＥＣｓ体外迁移及其受体表达??Ａ：不同浓度ＬＰＡ体外均可诱导ＯＥＣｓ趋化性迁移，呈浓度依赖性且在５?ｐＭ浓??度下作用最为显著。Ｂ：?ｑＲＴ－ＰＣＲ检测ＯＥＣｓ中ＬＰＡＲ１、ＬＰＡＲ２、ＬＰＡＲ３的表达量。??Ｃ：在ＬＰＡ诱导体外迁移６?ｈ后，结晶紫染色穿过滤膜的细胞。Ｂａｒ?＝１００?｜ａｍ，每组??实验ｎ＝３，?＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１。??为了证实ＬＰＡＲ１在ＬＰＡ诱导的ＯＥＣｓ迁移中的作用，我们发现当Ｋｉｌ６４２５??（ＬＰＡＲ１／３拮抗剂）存在的情况下显着抑制了?ＬＰＡ诱导的ＯＥＣｓ迁移（图４Ａ）；为??
嗅鞘细胞归巢的作用及机制研究?实验结果??（ＬＰＡＲｌ－ｓｈＲＮＡ），首先通过?ｑＲＴ－ＰＣＲ?及?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?检测?ＯＥＣｓ?中?ＬＰＡＲ１?的表达量，??检测慢病毒千扰效率，干扰ＬＰＡＲ１的ＯＥＣｓ中ＬＰＡＲ１的表达量下降了?８０％?（图??４Ｂ－Ｃ）。接下来，Ｂｏｙｄｅｎ?ｃｈａｍｂｅｒ实验检测干扰了?ＬＰＡＲ１的ＯＥＣｓ向ＬＰＡ的趋化性??迁移能力，与对照组（转染ｓｃｒａｍｂｌｅ－ｓｈＲＮＡ）相比，当ＯＥＣｓ中ＬＰＡＲ１被干扰后，??其趋化性迁移能力显著降低（图４Ｄ）。总之，以上结果表明ＬＰＡＲ１介导ＬＰＡ诱导的??ＯＥＣｓ体外迁移。??Ａ?？?ｃ?１．５－１?口?ｓｃｒａｍｂｌｅ??３１?Ｉ?１?＾?ｍ?ｓｈ－ＬＰＡＲ１??Ｉ?Ｉ?１．０．??ｉ?■??■??Ｉ?１－?｜??幽?＿?１。．。丨?Ｉ?，?Ｉ?＿??Ｚ?Ｊ１．?，?Ｉ?Ｕ?＿?＿?／?／??ｙ?＊?ｚ?＊?ｆ??ｃ?Ｄ?”??ＬＰＡＲ１?ｆＨＰＭＭ??Ｚ?Ｚ?ｓ?Ｊｌ．?Ｉ?＿?＿?＿??＾?＾?＾ｔ＾ＰＡＲＩ?：?？?？?＾??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＬＰＡ??图４．?ＬＰＡＲｌ介导ＬＰＡ诱导ＯＥＣｓ的迁移??Ａ：在Ｂｏｙｄｅｎ?ｃｈａｍｂｅｒ上下室均加入ＬＰＡＲｌ受体抑制剂Ｋｉｌ６４２５，?ＯＥＣｓ向ＬＰＡ??的迁移能力显著被抑制。Ｂ和Ｃ：?ｑＲＴ－ＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测ＬＰＡＲｌ表达从而验证??ＬＰＡＲｌ的千扰效率，以乱序的Ｓｃｒａｍｂｌｅ?ｓｌｉＲＮＡ为ｃｏｎｔｒｏｌ进行比较，标准化为１。Ｄ：??以感染了?Ｓｃｒａｍｂｌｅ慢病毒的ＯＥＣｓ为对照，Ｂｏｙｄｅｎ?ｃｈａｍｂｅｒ检
【参考文献】：
期刊论文
[1]Efficacy of chitosan and sodium alginate scaffolds for repair of spinal cord injury in rats[J]. Zi-ang Yao,Feng-jia Chen,Hong-li Cui,Tong Lin,Na Guo,Hai-ge Wu. Neural Regeneration Research. 2018(03)
[2]中国创伤性脊髓损伤流行病学和疾病经济负担的系统评价[J]. 陈星月,陈栋,陈春慧,王凯,唐笠,李宇哲,吴爱悯. 中国循证医学杂志. 2018(02)
[3]透明质酸支架材料:应用研究与产品转化前景[J]. 张晓鸥,吕旸,毛华,范馨仪,黄思玲,郭学平. 中国组织工程研究. 2018(02)
[4]Human placenta-derived mesenchymal stem cells loaded on linear ordered collagen scaffold improves functional recovery after completely transected spinal cord injury in canine[J]. Sufang Han,Zhifeng Xiao,Xing Li,Huan Zhao,Bin Wang,Zhixue Qiu,Zhi Li,Xin Mei,Bai Xu,Caixia Fan,Bing Chen,Jin Han,Yanzheng Gu,Huilin Yang,Qin Shi,Jianwu Dai. Science China（Life Sciences）. 2018(01)
[5]丝素蛋白多孔支架联合硫酸软骨素酶ABC对脊髓损伤的治疗作用[J]. 尤克民,沈忆新,陈道东,范志海,张鹏,张锋,左保齐. 中华创伤杂志. 2014 (09)
[6]丝素蛋白/透明质酸复合多孔支架材料的表征及细胞相容性[J]. 范志海,陆福男,张锋,沈忆新. 中国组织工程研究. 2012(29)
[7]不同直径丝素蛋白纳米纤维对嗅鞘细胞生长影响的研究[J]. 范志海,吴鹏,左保齐,张焕相,沈忆新. 中华临床医师杂志(电子版). 2012(11)
[8]丝素蛋白多孔支架在大鼠脊髓血管化中的实验研究[J]. 谢亮,沈忆新,王新宏,范志海,左保齐,张锋. 中国现代医药杂志. 2012(04)
[9]Wnt3a signaling promotes proliferation,myogenic differentiation,and migration of rat bone marrow mesenchymal stem cells[J]. Yan-chang SHANG~(2,3),Shu-hui WANG~4,Fu XIONG~5,Cui-ping ZHAO~2,Fu-ning PENG~2,Shan-wei FENG~2,Mei-shan LI~2,YongLI~5,Cheng ZHANG~(2,5,6)~2 Department of Neurology First Affiliated Hospital,Sun Yat-sen University,Guangzhou 510080,China,~3 Department of Geriatric NeurologyChinese People’s Liberation Army General Hospital,Beijing 100853,China;~4 Department of Neurology,Beijing Friendship Hospital,CapitalMedical University,Beijing 100050,China,~5 Center for Stem Cell Biology and Tissue Engineering,Sun Yat-sen University Guangzhou510080.China. Acta Pharmacologica Sinica. 2007(11)
[10]胶原或明胶吸附施万细胞移植促进全横断脊髓损伤修复的研究[J]. 吴立志,曾园山,李海标,蔡道章,张燕青,郭家松,丁英,陈穗君. 解剖学报. 2003(03)
本文编号：3119099
【文章来源】：苏州大学江苏省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２?Ａ－Ｂ），具有典型的双极，三极或更不规则的??形状，大约１０?ｄ后相互缠绕交织成网状
在差速贴壁后的第３ｄＯＥＣｓ逐渐从细胞团簇中爬出。Ｂ：?ＯＥＣｓ形态特征出??现双极、三级或多级形态并相互交织成网状。Ｃ－Ｄ：?ＯＥＣｓ免疫荧光染色，ＮＧＦＲｐ７５??（绿色），ＤＡＰＩ（蓝色）。Ｅ：?ｍｅｒｇｅ后图像显示＞９４％的细胞为ＮＧＦＲＰ７５＋，Ｂａｒ＝２５０??（ｉｍ。??为了评估ＯＥＣｓ在体外的定向迁移，我们利用Ｂｏｙｄｅｎ?ｃｈａｍｂｅｒ装置检测ＯＥＣｓ??向不同浓度ＬＰＡ的趋化性迁移，我们发现ＬＰＡ以浓度依赖性方式诱导ＯＥＣｓ定向迁??移，且在５｜ｉＭ时效果最显著（图３Ａ，Ｃ），后续以此浓度进行研究。通过ｑＲＴ－ＰＣＲ进??一步检测ＯＥＣｓ中ＬＰＡ受体的表达，结果显示与ＬＰＡＲ２和ＬＰＡＲ３相比，ＬＰＡＲ１的??表达量最高（图３Ｂ），为ＯＥＣｓ表面最主要的ＬＰＡ受体亚型。??Ａ?．?Ｂ??ｓ?＊?．．?１１＾??ｉｎｎｌｌｌ?ｌ：ＬＬｍ??°?ｉ?＾?￣?？?￣（ＭＭ）?，，／１??Ｃｏｎｔｒｏｌ?０．１?（ｉＭ?ｌ｜ｉＭ?５＾ｉＭ?１０［ｉＭ??图３．?ＬＰＡ诱导ＯＥＣｓ体外迁移及其受体表达??Ａ：不同浓度ＬＰＡ体外均可诱导ＯＥＣｓ趋化性迁移，呈浓度依赖性且在５?ｐＭ浓??度下作用最为显著。Ｂ：?ｑＲＴ－ＰＣＲ检测ＯＥＣｓ中ＬＰＡＲ１、ＬＰＡＲ２、ＬＰＡＲ３的表达量。??Ｃ：在ＬＰＡ诱导体外迁移６?ｈ后，结晶紫染色穿过滤膜的细胞。Ｂａｒ?＝１００?｜ａｍ，每组??实验ｎ＝３，?＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１。??为了证实ＬＰＡＲ１在ＬＰＡ诱导的ＯＥＣｓ迁移中的作用，我们发现当Ｋｉｌ６４２５??（ＬＰＡＲ１／３拮抗剂）存在的情况下显着抑制了?ＬＰＡ诱导的ＯＥＣｓ迁移（图４Ａ）；为??
嗅鞘细胞归巢的作用及机制研究?实验结果??（ＬＰＡＲｌ－ｓｈＲＮＡ），首先通过?ｑＲＴ－ＰＣＲ?及?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?检测?ＯＥＣｓ?中?ＬＰＡＲ１?的表达量，??检测慢病毒千扰效率，干扰ＬＰＡＲ１的ＯＥＣｓ中ＬＰＡＲ１的表达量下降了?８０％?（图??４Ｂ－Ｃ）。接下来，Ｂｏｙｄｅｎ?ｃｈａｍｂｅｒ实验检测干扰了?ＬＰＡＲ１的ＯＥＣｓ向ＬＰＡ的趋化性??迁移能力，与对照组（转染ｓｃｒａｍｂｌｅ－ｓｈＲＮＡ）相比，当ＯＥＣｓ中ＬＰＡＲ１被干扰后，??其趋化性迁移能力显著降低（图４Ｄ）。总之，以上结果表明ＬＰＡＲ１介导ＬＰＡ诱导的??ＯＥＣｓ体外迁移。??Ａ?？?ｃ?１．５－１?口?ｓｃｒａｍｂｌｅ??３１?Ｉ?１?＾?ｍ?ｓｈ－ＬＰＡＲ１??Ｉ?Ｉ?１．０．??ｉ?■??■??Ｉ?１－?｜??幽?＿?１。．。丨?Ｉ?，?Ｉ?＿??Ｚ?Ｊ１．?，?Ｉ?Ｕ?＿?＿?／?／??ｙ?＊?ｚ?＊?ｆ??ｃ?Ｄ?”??ＬＰＡＲ１?ｆＨＰＭＭ??Ｚ?Ｚ?ｓ?Ｊｌ．?Ｉ?＿?＿?＿??＾?＾?＾ｔ＾ＰＡＲＩ?：?？?？?＾??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＬＰＡ??图４．?ＬＰＡＲｌ介导ＬＰＡ诱导ＯＥＣｓ的迁移??Ａ：在Ｂｏｙｄｅｎ?ｃｈａｍｂｅｒ上下室均加入ＬＰＡＲｌ受体抑制剂Ｋｉｌ６４２５，?ＯＥＣｓ向ＬＰＡ??的迁移能力显著被抑制。Ｂ和Ｃ：?ｑＲＴ－ＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测ＬＰＡＲｌ表达从而验证??ＬＰＡＲｌ的千扰效率，以乱序的Ｓｃｒａｍｂｌｅ?ｓｌｉＲＮＡ为ｃｏｎｔｒｏｌ进行比较，标准化为１。Ｄ：??以感染了?Ｓｃｒａｍｂｌｅ慢病毒的ＯＥＣｓ为对照，Ｂｏｙｄｅｎ?ｃｈａｍｂｅｒ检
【参考文献】：
期刊论文
[1]Efficacy of chitosan and sodium alginate scaffolds for repair of spinal cord injury in rats[J]. Zi-ang Yao,Feng-jia Chen,Hong-li Cui,Tong Lin,Na Guo,Hai-ge Wu. Neural Regeneration Research. 2018(03)
[2]中国创伤性脊髓损伤流行病学和疾病经济负担的系统评价[J]. 陈星月,陈栋,陈春慧,王凯,唐笠,李宇哲,吴爱悯. 中国循证医学杂志. 2018(02)
[3]透明质酸支架材料:应用研究与产品转化前景[J]. 张晓鸥,吕旸,毛华,范馨仪,黄思玲,郭学平. 中国组织工程研究. 2018(02)
[4]Human placenta-derived mesenchymal stem cells loaded on linear ordered collagen scaffold improves functional recovery after completely transected spinal cord injury in canine[J]. Sufang Han,Zhifeng Xiao,Xing Li,Huan Zhao,Bin Wang,Zhixue Qiu,Zhi Li,Xin Mei,Bai Xu,Caixia Fan,Bing Chen,Jin Han,Yanzheng Gu,Huilin Yang,Qin Shi,Jianwu Dai. Science China（Life Sciences）. 2018(01)
[5]丝素蛋白多孔支架联合硫酸软骨素酶ABC对脊髓损伤的治疗作用[J]. 尤克民,沈忆新,陈道东,范志海,张鹏,张锋,左保齐. 中华创伤杂志. 2014 (09)
[6]丝素蛋白/透明质酸复合多孔支架材料的表征及细胞相容性[J]. 范志海,陆福男,张锋,沈忆新. 中国组织工程研究. 2012(29)
[7]不同直径丝素蛋白纳米纤维对嗅鞘细胞生长影响的研究[J]. 范志海,吴鹏,左保齐,张焕相,沈忆新. 中华临床医师杂志(电子版). 2012(11)
[8]丝素蛋白多孔支架在大鼠脊髓血管化中的实验研究[J]. 谢亮,沈忆新,王新宏,范志海,左保齐,张锋. 中国现代医药杂志. 2012(04)
[9]Wnt3a signaling promotes proliferation,myogenic differentiation,and migration of rat bone marrow mesenchymal stem cells[J]. Yan-chang SHANG~(2,3),Shu-hui WANG~4,Fu XIONG~5,Cui-ping ZHAO~2,Fu-ning PENG~2,Shan-wei FENG~2,Mei-shan LI~2,YongLI~5,Cheng ZHANG~(2,5,6)~2 Department of Neurology First Affiliated Hospital,Sun Yat-sen University,Guangzhou 510080,China,~3 Department of Geriatric NeurologyChinese People’s Liberation Army General Hospital,Beijing 100853,China;~4 Department of Neurology,Beijing Friendship Hospital,CapitalMedical University,Beijing 100050,China,~5 Center for Stem Cell Biology and Tissue Engineering,Sun Yat-sen University Guangzhou510080.China. Acta Pharmacologica Sinica. 2007(11)
[10]胶原或明胶吸附施万细胞移植促进全横断脊髓损伤修复的研究[J]. 吴立志,曾园山,李海标,蔡道章,张燕青,郭家松,丁英,陈穗君. 解剖学报. 2003(03)
本文编号：3119099
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