脉冲电磁场促进大鼠骨髓间充质干细胞活性的实验研究

发布时间：2021-04-08 17:38

　　随着我国老龄化社会的加剧,临床上骨缺损的修复将面临极大的挑战。目前大段骨缺损主要以自体骨修复作为“金标准”,但自体骨来源有限,限制了其发展;异体骨、异种骨会产生免疫排斥反应,引起炎症,加大感染等风险。近年来,组织工程的研究与发展为大段骨缺损提供了一个新的途径——进行人工器官移植,其原理是将种子细胞和材料支架在体外构建出与机体组织结构及功能相似的人工组织或器官,植入病损部位来实现修复病损部位的组织或器官。由于骨髓间充质干细胞（BMSCs）具有来源稳定、取材方便、在一定的诱导条件下可向多种类型的细胞分化的优点,可作为组织工程骨的理想种子细胞。但是如何体外快速、有效的扩增足够数量的BMSCs是组织工程骨应用于临床需要解决的问题之一。组织工程骨支架材料需要具有良好的生物相容性、可加工性、可降解性、降解产物对机体无毒副作用以及具有合适的力学性能。羟基磷灰石（HA）材料具有良好的生物相容性与骨传导性。聚己內酯（PCL）材料具有良好的延展性能和可降解性,将两者结合制备HA/PCL复合材料作为组织工程骨支架材料有着广泛的应用前景。但是将种子细胞接种于支架材料中如何保持BMSCs的活性从而形成骨组织仍然... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
缩略语表
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英文摘要
前言
文献回顾
    文献回顾一 组织工程骨的研究进展
        1 种子细胞
            1.1 干细胞的分类
            1.2 BMSCs
            1.3 成骨细胞
        2 组织工程骨生物支架
            2.1 组织工程骨对支架的要求
            2.2 组织工程骨支架种类
            2.3 组织工程骨支架的制备方法
        3 组织工程骨组织构建
    文献回顾二 低频脉冲电磁场对骨组织的影响
        1 PEMF
        2 PEMF对骨组织的影响
        3 PEMF对骨细胞的影响
            3.1 PEMF对成骨细胞及破骨细胞的影响
            3.2 PEMF对BMSCs的影响
实验一 大鼠骨髓间充质干细胞的培养
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 主要仪器
        1.3 主要试剂
    2 方法
        2.1 BMSCs的分离及原代培养
        2.2 BMSCs的传代培养
        2.3 BMSCs的细胞计数
        2.4 BMSCs流式细胞仪鉴定
        2.5 BMSCs多项分化能力鉴定
    3 结果
        3.1 BMSCs原代培养
        3.2 BMSCs流式细胞仪鉴定
        3.3 BMSCs成骨诱导鉴定
        3.4 BMSCs成脂诱导鉴定
    4 讨论
实验二 具有骨诱导能力的HA/PCL组织工程骨支架的制备及表征
    1 材料
    2 方法
        2.1 HA/PCL复合支架材料的制备
        2.2 HA/PCL复合支架材料的样品表征
        2.3 体外细胞相容性表征
    3 结果
        3.1 体式显微镜观察
        3.2 扫描电子显微镜观察
        3.3 细胞相容性
    4 讨论
实验三 PEMF对BMSCs的增殖与分化的影响
    1 材料
    2 方法
        2.1 BMSCs细胞培养
        2.2 PEMF电磁刺激仪
        2.3 MTT检测
        2.4 ALP活性检测
        2.5 统计学方法
    3 结果
        3.1 PEMF对BMSCs增殖的影响
        3.2 PEMF对BMSCs ALP活性的影响
    4 讨论
实验四 PEMF对组织工程骨的体外研究
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 主要仪器与试剂
    2 方法
        2.1 BMSCs的原代培养
        2.2 HA/PCL组织工程骨支架的构建
        2.3 PEMF电磁刺激仪
        2.4 PEMF对HA/PCL组织工程骨支架中BMSCs活性的影响
        2.5 PEMF对HA/PCL组织工程骨支架中BMSCs细胞骨架的影响
        2.6 PEMF对HA/PCL组织工程骨支架中BMSCs ALP活性的影响
        2.7 PEMF对HA/PCL组织工程骨支架中BMSCs矿化的影响
        2.8 RT-PCR检测
        2.9 统计学方法
    3 结果
        3.1 PEMF对HA/PCL组织工程骨支架中BMSCs活性与增殖的影响
        3.2 PEMF 对 HA/PCL 组织工程骨支架中 BMSCs 细胞骨架影响
        3.3 PEMF对HA/PCL组织工程骨支架中BMSCs细胞ALP活性的影响
        3.4 PEMF对HA/PCL组织工程骨支架中BMSCs矿化能力的影响
        3.5 PEMF对HA/PCL组织工程骨支架中BMSCs基因表达的影响
    4 讨论
小结
参考文献
个人简历和研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]脉冲电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、成骨分化和Wnt/β-catenin信号通路的影响[J]. 周予婧,王朴,陈红英,刘遄,季侨丹,阳筱甜,高强,何成奇.  四川大学学报(医学版). 2015(03)
[2]骨组织工程支架研究进展[J]. 徐大朋,王绪凯.  中国实用口腔科杂志. 2014(03)
[3]骨组织工程支架材料应用于大段骨缺损的实验研究进展[J]. 李东亚,郑欣,陈一心.  创伤外科杂志. 2013(01)
[4]Proliferation and differentiation into endothelial cells of human bone marrow mesenchymal stem cells （MSCs） on poly DL-lactic-co-glycolic acid （PLGA） films[J]. YUE Huimin1*, ZHANG Lei2*, WANG Yunfang1, LIANG Feng1, GUAN Lidong1, LI Shaoqing1, YAN Fang1, NAN Xue1, BAI Cixian1, LIN Feng2, YAN Yongnian2 & PEI Xuetao1 1. Department of Stem Cell Biology, Institute of Transfusion Medicine, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850, China; 2. Research Center of Laser Rapid Forming, Mechanical Department of Tsinghua University, Beijing 100084, ChinaThese authors contributed equally to this work..  Chinese Science Bulletin. 2006(11)
[5]低强度脉冲电磁场对兔心血管系统的影响[J]. 罗二平,焦李成,申广浩,吴小明,路丽华,徐巧玲,刘鲁伟.  第四军医大学学报. 2005(06)
[6]电磁场细胞生物效应研究进展[J]. 童珊,黄华,陈槐卿.  国外医学.生物医学工程分册. 2004(05)
[7]脉冲电磁场促进人骨髓间充质干细胞成骨的研究[J]. 赵敏,许建中,周强,王序全,朱灏,秦辉,单建林.  中国矫形外科杂志. 2004(06)
[8]电磁辐射生物效应的机理研究述评[J]. 刘亚宁.  基础医学与临床. 2000(01)
[9]谈谈生物电磁学研究热点——非热效应[J]. 陈国璋,陈惠晓.  物理. 1998(03)



本文编号：3125961