MicroRNA-22调控骨肉瘤细胞自噬/增殖在顺铂化疗敏感性中作用的实验研究

发布时间：2021-04-17 12:23

　　目的:探讨骨肉瘤（osteosarcoma,OS）细胞的增殖及MTDH（Metadherin）介导的自噬在顺铂化疗敏感性中的作用,进一步研究microRNA-22对其调控的作用机制,为骨肉瘤的靶向治疗提供新的思路。方法:通过体外培养骨肉瘤细胞系MG-63进行实验研究,将培养所得细胞分成ctrl组,NC组,cisplatin组,cisplatin+miR-22组。利用MTT检测法和细胞克隆实验分别在6,12,24h检测MG-63细胞增殖的变化,运用MDC染色检测MG-63细胞自噬的程度,并且运用LC3流式检测实验检测自噬相关蛋白LC3表达的变化。利用透射电镜实验（TEM）检测cisplatin和miR-22联合处理对骨肉瘤细胞自噬的影响,定量PCR法检测Beclin1、LC3、ATG5、MTDH的mRNA表达变化,Western blotting定量检测Beclin1、LC3、ATG5、MTDH的蛋白表达。L uciferase assay（荧光素酶）检测自噬基因MTDH是否为miR-22的直接靶点,Western blotting和定量PCR检测miR-22过表达和干扰时,MTDH表达... 

【文章来源】：内蒙古医科大学内蒙古自治区

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

12、24小时不同组中骨肉瘤细胞增殖的变化

图 2 cisplatin 和 miR-22 对 MG-63 细胞克隆形成的影响*P < 0.05 **P < 0.01 ctrl-顺铂未处理组 NC-阴性对照 cisplatin-顺铂组cisplatin+miR-22 - miR-22 和顺铂共处理组2.2 miR-22 可抑制骨肉瘤细胞中自噬的产生为了验证骨肉瘤细胞中 miR-22 调节自噬的作用，本研究将 MG-63 细胞系分为 ctrl 组，NC 组，cisplatin 组，cisplatin+miR-22 组四组。加入 200μL 的 MDC染色液和 DAPI，分别在 6,12,24 小时用激光共聚焦显微镜拍照。结果显示顺铂可促进 MG-63 细胞中自噬的表达，而 miR-22 可抑制由顺铂引起的细胞自噬(图 3)。然后用流式细胞仪检测自噬相关因子 LC3 的表达，进而阐述 MG-63 细胞系中自噬的表达。结果表明顺铂促进细胞自噬相关蛋白 LC3 的表达(15.23±0.153)，miR-22可明显抑制顺铂引起的细胞LC3表达升高(12.57±0.306)(图4，**P < 0.01)。接下来用透射电子显微镜（TEM）对 MG-63 细胞中自噬溶酶体进行评价，结果发现每组细胞中均有自噬溶酶体的存在，随着时间的延长，自噬小体慢慢产生，

图 3 顺铂和 miR-22 对 MG-63 细胞自噬的影响ctrl-顺铂未处理组 NC-阴性对照 cisplatin-顺铂组 cisplatin+miR-22 - miR-22 和顺铂共处理组

【参考文献】：
期刊论文
[1]骨肉瘤化疗耐药相关基因的研究进展[J]. 邱俊骏,施鑫,赵建宁,吴苏稼.  医学研究生学报. 2005(02)



本文编号：3143449