CircUSP45通过miR-127-5p/PTEN/AKT信号通路在激素性股骨头坏死中的机制研究

发布时间：2021-04-19 02:30

　　目的研究circRNA在人激素性股骨头坏死标本中的表达情况,明确差异表达circRNA的表达谱,并验证差异表达的circRNA,筛选出目标分子;研究circUSP45对细胞功能如细胞增殖、细胞凋亡和成骨分化的调控作用,从细胞和分子生物学水平验证circUSP45调控细胞功能的机制;深入研究circUSP45/miR-127-5p/PTEN/AKT信号轴在激素性股骨头坏死中的调控机制,并通过大鼠激素性股骨头坏死模型进行验证。方法第一部分:收集临床激素性股骨头坏死的股骨头和股骨颈骨折股骨头样本,通过倾向值匹配的方法进一步筛选出个体差异较小的样本,并通过circRNA二代测序和生信分析筛选出差异表达的circRNA并构建circRNA表达谱,最后通过q-PCR验证差异表达的circRNA,并选定最终深入研究的circRNA。第二部分:在细胞水平使用地塞米松处理细胞,通过q-PCR验证circUSP45在细胞水平和临床样本是否一致;通过CCK-8、EdU染色验证circUSP45对细胞增殖能力的影响;通过TUNEL染色、western blotting和Annexin V FITC-PI凋亡双... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：122 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

临床样本筛选的流程图

Male 39 (56.52) 51 (34.23)Female 30 (34.23) 98 (65.77)表 1.2 倾向值匹配之后的结果After pairing SONFH Fracture P-valueN=40 N=40Age mean(95%CI) 53.90 (50.59,57.43) 55.83 (52.40,59.48) 0.44BMI mean(95%CI) 22.72 (21.83,23.66) 22.83 (21.93,23.76) 0.87Gender n(%) 0.12Male 25 (62.50) 18 (45)Female 15 (37.50) 22 (55)另外，我们将筛选出的三个激素性股骨头坏死的股骨头与三个由于创伤行髋关节置换的股骨头进行大体观察、X 线观察（图 1.2），并评估病人 X 线平片进一步确认并评估股骨头的形态以及影像学特征（图 1.3）。

图 1.3 激素性股骨头坏死患者与创伤行髋关节置换患者的术前 X 线平片 circRNA 二代测序与 circRNA 表达网络的构建首先我们检测提取 RNA 的浓度和质量（表 1.3），并通过电泳检测各个条带 的完整性和 gDNA 污染（图 1.4）。表 1.3 各个测序样本的 RNA 浓度与 RNA 总量品编号 样品名称 OD260/280比值 浓度(ng/μl) 体积 (μl) 数量 (μg)1 1 1.90440229.672 2 1.91414 29.103 3 2.05468 210.314 4 1.92452 29.955 5 2.00490 210.796 6 1.97446 29.82


本文编号：3146648