姜黄素联合5-Aza-CdR对骨肉瘤抑癌基因P16，PTEN的去甲基化作用研究

发布时间：2021-04-24 20:01

　　目的:研究姜黄素联合5-Aza-CdR是否能增强对骨肉瘤抑癌基因P16,PTEN的去甲基化作用。方法:（1）单独或联合使用不同质量浓度的姜黄素与5-Aza-CdR作用于骨肉瘤细胞;（2）观察细胞的生长情况和形态变化（采用倒置相差显微镜）;（3）CCK-8法检测细胞生长抑制率;（4）甲基化特异性聚合酶链反应（methyl-ation specific PCR,MSP）法检测干预前后骨肉瘤Saos-2细胞PTEN基因和P16基因的甲基化状态;（5）RT-PCR检测相关基因P16,PTEN的表达情况;（6）western blot检测P16,PTEN蛋白水平的表达情况。结果:（1）姜黄素和5-Aza-CdR均呈现出以时间和浓度梯度依赖性的关系抑制骨肉瘤细胞的生长。（2）MSP法检测结果提示姜黄素与5-Aza-CdR单独及联合使用均有一定的去甲基化作用,二者联合使用时去甲基化作用比单独作用时效果明显增强。（3）与空白对照组相比,RT-PCR和western blot结果提示姜黄素与5-Aza-CdR联合使用时,P16,PTEN的基因、蛋白表达水平均增高（P<0.05）。结论:（1）姜黄素... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：40 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
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中英文缩略词表
第1章 引言
第2章 材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞株来源
        2.1.2 主要试剂及耗材
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 主要试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 器材的准备
        2.2.2 人骨肉瘤Saos-2 细胞的复苏、培养和传代
        2.2.3 用倒置相差显微镜观察细胞形态
        2.2.4 CCK-8 法测定Saos-2 细胞增殖
        2.2.5 细胞的DNA提取
        2.2.6 亚硫酸氢盐修饰基因组DNA
        2.2.7 Western-blot检测相关蛋白表达水平
        2.2.8 RT-PCR检测相关基因表达水平
    2.3 统计学处理
第3章 结果
    3.1 细胞形态观察
    3.2 细胞增值测定
    3.3 药物作用于人骨肉瘤Saos-2 细胞前后的p16和PTEN基因甲基化的变化
    3.4 RT-PCR检测各组PTEN、P16 mRNA表达水平的结果
        3.4.1 总RNA完整性检测
        3.4.2 RT-PCR结果及灰度分析结果显示
    3.5 Western blot检测各组PTEN、P16蛋白的表达水平
第4章 讨论
第5章 结论与不足之处
    5.1 结论
    5.2 不足之处
致谢
参考文献
综述
    References


【参考文献】：
期刊论文
[1]PTEN甲基化及其异常表达与膀胱移行细胞癌的关系[J]. 延敏博,孙华宾,刘燕,徐白生.  第三军医大学学报. 2012(12)
[2]DNA甲基化与癌症[J]. 韩竞男,鲁昊骋,梁静.  中国生物化学与分子生物学报. 2012(02)
[3]抑癌基因甲基化异常在肝癌中的研究进展及临床应用[J]. 孙静哲,杨学习.  广东医学. 2011(04)
[4]肿瘤抑制基因p53的研究进展[J]. 成秀梅.  现代诊断与治疗. 2008(03)
[5]PTTG、c-myc在人骨肉瘤中的表达及其意义[J]. 肖强,王体沛.  临床外科杂志. 2007(11)
[6]去甲基化在肿瘤治疗中的作用[J]. 张嘉玲,苏秀兰.  中国误诊学杂志. 2006(23)



本文编号：3157988