缺血后适应干预大鼠脊髓再灌注损伤时对CaSR和Caspase-12的影响
发布时间：2021-05-28 15:11
目的:验证缺血后适应（Ischemic post-conditioning,IPC）对大鼠脊髓缺血再灌注损伤（Spinal cord ischemia reperfusion injury,SCIRI）的保护作用并检测其对钙敏感受体（Calcium-sensing receptor,CaSR）及内质网应激相关标志物Caspase-12表达的影响。方法:五十只SD大鼠被完全随机化等分为5个组（为充分避免因不同动物个体之间的差异而产生随机误差）:假手术组（Sham组）,缺血再灌注模型组（IR组）,IR模型+缺血后适应组（IPC组）,IPC组+激动剂（IPC-GdCl3组）和IR模型+抑制剂组（NPS2390组）。Sham组在手术中只需显露大鼠腹主动脉的一段而不用动脉夹阻断血流,其余各组阻断腹主动脉25分钟左右后再松开,构建脊髓IR模型;IPC组于恢复血流3-4分钟后给予三个周期的缺血后适应操作;IPC-GdCl3组在连续2天尾静脉注射CaSR激动剂GdCl3后行IPC组操作;对于NPS2390组我们采取的干预方法是提前2天,每天通过尾静脉注射一定量的NPS2390,随后建立IR模型。通过3...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
暴露右肾动脉和左肾动脉之间的腹主动脉段
缺血后适应干预大鼠脊髓再灌注损伤时对CaSR和Caspase-12的影响20（4）待切片晾干燥，半数切片每张滴加一滴CaSR抗体（1:400），另一半每张张滴加一滴Caspase-12抗体（1:400），所有切片于湿盒中4℃环境下孵育过夜。（5）各切片分别用PBS洗濯两次，每张滴加一滴HRP，37℃条件下孵育半小时，最后用PBS洗净并烘干。（6）拿出新配的DAB显色液滴加在切片上，显微镜下观察并控制操作，数分钟后用苏木素复染、清水漂洗、蓝化，脱水过程参照前文使用梯度酒精的流程，二甲苯透明处理、树胶封固晾干后CaSR切片选攘200高倍视野，Caspase-12切片选攘400高倍视野，于镜下观察。CaSR阳性产物呈棕色或褐色、Caspase-12阳性产物呈蓝色，拍照保存图像数据。3.5实验结果3.5.1蛋白质免疫印迹试验图3.1蛋白质印迹法检测各组CaSR及Caspase-12蛋白表达
免疫组化观察各组CaSR表达（×200）
【参考文献】：
期刊论文
[1]大鼠脊髓缺血再灌注损伤后钙敏感受体的表达变化及其抑制剂NPS2390的作用[J]. 浦梦安,孙继芾,束浩明,孙勇,黄永辉. 江苏大学学报(医学版). 2019(01)
[2]内质网应激中Caspase-12的核心作用[J]. 谢羽,孙警辉,伍春莲. 基因组学与应用生物学. 2017(09)
[3]葛根素治疗急性脊髓缺血再灌注损伤大鼠的神经保护机制[J]. 季相禄,田峰,王斌,肖万安. 中国医科大学学报. 2017(04)
[4]Propofol protects against blood-spinal cord barrier disruption induced by ischemia/reperfusion injury[J]. Li-jie Xie,Jin-xiu Huang,Jian Yang,Fen Yuan,Shuang-shuang Zhang,Qi-jing Yu,Ji Hu. Neural Regeneration Research. 2017(01)
[5]大鼠脊髓缺血再灌注后早期脊髓内促炎因子及抗炎因子的表达[J]. 苏权,党晓谦,王坤正,时志斌. 陕西医学杂志. 2016(10)
[6]不同剂量右美托咪定对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用[J]. 吕少君,翁浩,刘海健,刘荣,齐乐,徐志勇. 中国老年学杂志. 2016(09)
[7]大鼠腰动脉结扎后脊髓缺血形态与功能的早期变化[J]. 庄源东,傅超锋,陈春美,王春华,赵伟,SAID IDRISSA AHMADA. 中华实验外科杂志. 2015 (11)
[8]高压氧治疗脊髓损伤机制的研究进展[J]. 孙文志,鲁世保. 中国脊柱脊髓杂志. 2014(12)
[9]炙马钱子对实验性兔脊髓损伤Tarlov评分的影响[J]. 张芹,杨科朋,侯群,魏新侠,魏丹丹. 中国医药科学. 2014(09)
[10]大鼠脊髓损伤后CBS和BBB评分比较研究[J]. 殷铭,徐又佳. 中国血液流变学杂志. 2012 (03)
硕士论文
[1]腰动脉结扎后脊髓缺血神经损伤与修复的实验研究[D]. 傅超锋.福建医科大学 2016
[2]阿托伐他汀增强脊髓损伤大鼠内皮祖细胞动员及促进神经修复的实验研究[D]. 魏正军.天津医科大学 2012
[3]预先静脉注射维生素C对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用[D]. 李贵振.华中科技大学 2010
[4]钙敏感受体对大鼠肝脏缺血—再灌注损伤的影响及机制[D]. 邢文婧.哈尔滨医科大学 2010
本文编号：3208272
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
暴露右肾动脉和左肾动脉之间的腹主动脉段
缺血后适应干预大鼠脊髓再灌注损伤时对CaSR和Caspase-12的影响20（4）待切片晾干燥，半数切片每张滴加一滴CaSR抗体（1:400），另一半每张张滴加一滴Caspase-12抗体（1:400），所有切片于湿盒中4℃环境下孵育过夜。（5）各切片分别用PBS洗濯两次，每张滴加一滴HRP，37℃条件下孵育半小时，最后用PBS洗净并烘干。（6）拿出新配的DAB显色液滴加在切片上，显微镜下观察并控制操作，数分钟后用苏木素复染、清水漂洗、蓝化，脱水过程参照前文使用梯度酒精的流程，二甲苯透明处理、树胶封固晾干后CaSR切片选攘200高倍视野，Caspase-12切片选攘400高倍视野，于镜下观察。CaSR阳性产物呈棕色或褐色、Caspase-12阳性产物呈蓝色，拍照保存图像数据。3.5实验结果3.5.1蛋白质免疫印迹试验图3.1蛋白质印迹法检测各组CaSR及Caspase-12蛋白表达
免疫组化观察各组CaSR表达（×200）
【参考文献】：
期刊论文
[1]大鼠脊髓缺血再灌注损伤后钙敏感受体的表达变化及其抑制剂NPS2390的作用[J]. 浦梦安,孙继芾,束浩明,孙勇,黄永辉. 江苏大学学报(医学版). 2019(01)
[2]内质网应激中Caspase-12的核心作用[J]. 谢羽,孙警辉,伍春莲. 基因组学与应用生物学. 2017(09)
[3]葛根素治疗急性脊髓缺血再灌注损伤大鼠的神经保护机制[J]. 季相禄,田峰,王斌,肖万安. 中国医科大学学报. 2017(04)
[4]Propofol protects against blood-spinal cord barrier disruption induced by ischemia/reperfusion injury[J]. Li-jie Xie,Jin-xiu Huang,Jian Yang,Fen Yuan,Shuang-shuang Zhang,Qi-jing Yu,Ji Hu. Neural Regeneration Research. 2017(01)
[5]大鼠脊髓缺血再灌注后早期脊髓内促炎因子及抗炎因子的表达[J]. 苏权,党晓谦,王坤正,时志斌. 陕西医学杂志. 2016(10)
[6]不同剂量右美托咪定对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用[J]. 吕少君,翁浩,刘海健,刘荣,齐乐,徐志勇. 中国老年学杂志. 2016(09)
[7]大鼠腰动脉结扎后脊髓缺血形态与功能的早期变化[J]. 庄源东,傅超锋,陈春美,王春华,赵伟,SAID IDRISSA AHMADA. 中华实验外科杂志. 2015 (11)
[8]高压氧治疗脊髓损伤机制的研究进展[J]. 孙文志,鲁世保. 中国脊柱脊髓杂志. 2014(12)
[9]炙马钱子对实验性兔脊髓损伤Tarlov评分的影响[J]. 张芹,杨科朋,侯群,魏新侠,魏丹丹. 中国医药科学. 2014(09)
[10]大鼠脊髓损伤后CBS和BBB评分比较研究[J]. 殷铭,徐又佳. 中国血液流变学杂志. 2012 (03)
硕士论文
[1]腰动脉结扎后脊髓缺血神经损伤与修复的实验研究[D]. 傅超锋.福建医科大学 2016
[2]阿托伐他汀增强脊髓损伤大鼠内皮祖细胞动员及促进神经修复的实验研究[D]. 魏正军.天津医科大学 2012
[3]预先静脉注射维生素C对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用[D]. 李贵振.华中科技大学 2010
[4]钙敏感受体对大鼠肝脏缺血—再灌注损伤的影响及机制[D]. 邢文婧.哈尔滨医科大学 2010
本文编号：3208272
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