AMPK/SIRT-1在晚期糖基化终产物诱导人软骨细胞IL-1β与TNF-α表达中的作用
发布时间：2021-06-18 09:39
目的:通过细胞学实验,探究晚期糖基化终产物（Advanced glycation end products,AGEs）对人关节软骨细胞中IL-1β和TNF-α的影响,观察AMPK/SIRT-1在此过程中的作用及其与PPARγ的关系。方法:（1）不同浓度的AGEs（25μg/ml,50μg/ml,75μg/ml,100μg/ml）分别处理人关节软骨细胞24h后用Western Blot方法检测细胞内炎性因子IL-1β、TNF-α的蛋白表达水平,并用q-PCR检测细胞内IL-1β、TNF-α的m RNA含量。（2）AGEs（100μg/ml）处理人关节软骨细胞6h,12h,18h,24h后,用Western Blot测定炎性因子IL-1β、TNF-α的蛋白浓度,并用q-PCR检测细胞内IL-1β、TNF-α的m RNA含量。（3）不同浓度的AGEs（25μg/ml,50μg/ml,75μg/ml,100μg/ml）处理人关节软骨细胞24h后,Western Blot方法检测细胞p-AMPK、AMPK、SIRT-1的蛋白表达。（4）AGEs（100μg/ml）处理人关节软骨细胞6h,12h,...
【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
AGEs对人关节软骨细胞IL-1β的影响（量效）
AMPK/SIRT-1 在晚期糖基化终产物诱导人软骨细胞 IL-1β与 TNF-α表达中的作用表达差异均有统计学意义（P<0.05）。随 AGEs 处理时间的增加，IL-1β的蛋白含量与β-actin 的比值逐渐增高，从 0.25±0.12 到 1.05±0.11，P 值均<0.05；mRNA的相对表达量也逐渐增高，与对照组相比，24h 组的 mRNA 表达水平升高了 9.84倍，P 值均<0.05，如图 1-3。
图 1-4 AGEs 对人关节软骨细胞 TNF-α的影响（时效）。100μg/ml BSA-AGEs 刺激人关节软骨细胞 0-24h，Western Blot 和 q-PCR 分别检测 TNF-α蛋白浓度和 mRNA 水平。（A）WesternBlot 检测结果；（B）Western Blot 条带灰度分析结果；（C）q-PCR 分析结果。所有数据以X±SD 表示，n=3。*p<0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，与对照组（0h）比较。3.2 AGEs 对人关节软骨细胞 AMPK 和 SIRT-1 表达的影响在不同剂量（25μg/ml, 50μg/ml, 75μg/ml, 100μg/ml）的 BSA-AGEs 处理人关节软骨细胞 24h 后，使用 Western Blot 测定人关节软骨细胞内 AMPK 磷酸化水平和 SIRT-1 蛋白表达水平。结果显示，AMPK 磷酸化水平和 SIRT-1 蛋白表达水平均较对照组（0 μg/ml）明显降低（P<0.05）, 且均以 AGEs 浓度为 100μg/ml时作用最为明显。随 AGEs 浓度的增加，p-AMPK 与 AMPK 的比值逐渐减低，从 1.19±0.15 到 0.32±0.13，P 值均<0.05，如图 2-1。随 AGEs 浓度的增加，SIRT-1与β-actin 的比值逐渐减低，从 1.16±0.08 到 0.13±0.02，P 值均<0.05，如图 2-2。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Notch信号通路在膝骨关节炎软骨细胞凋亡中的作用研究[J]. 吴绍军,刘俊才,左银龙,李忠. 华西医学. 2018(09)
[2]骨性关节炎发病机制的研究进展[J]. 卫彦强,石继祥,纪斌,周强,章筛林,庞金辉. 医学综述. 2018(05)
[3]SIRT1功能的研究进展[J]. 刘璇,何继瑞. 西北国防医学杂志. 2018(01)
[4]肿瘤坏死因子-α在骨关节结核中的研究进展[J]. 梁思敏,蔡则成,马赫,戈朝晖. 宁夏医科大学学报. 2018(01)
[5]AMPK信号通路在糖尿病心肌病中的研究进展[J]. 张景怡,鲍翠玉,李晶. 中国药理学通报. 2017(11)
[6]微流控芯片流体剪切力和肿瘤坏死因子-α共同作用对大鼠软骨细胞表型的影响[J]. 石杨,盛坤,张敏,李洪敬,秦建华. 色谱. 2017(04)
[7]AMPK在骨关节炎发生发展中的作用[J]. 于辰曦,孙水. 生命的化学. 2016(06)
[8]膝骨关节炎软骨下炎症面积与关节液中白细胞介素-1含量的相关性研究[J]. 陈俊杰,庄汝杰,范续,张娅. 中医正骨. 2016(04)
[9]膝骨性关节炎患者关节液中MMP-7、MMP-9、TIMP-1、TNF-α的表达及意义[J]. 鲁海,卢超,张嘉良,刘文刚,倪新玲. 中国医药科学. 2015(22)
[10]白介素-1在骨关节炎发病机制中的研究进展[J]. 刘宏潇,殷海波,王海南. 中国骨伤. 2012(02)
本文编号：3236428
【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
AGEs对人关节软骨细胞IL-1β的影响（量效）
AMPK/SIRT-1 在晚期糖基化终产物诱导人软骨细胞 IL-1β与 TNF-α表达中的作用表达差异均有统计学意义（P<0.05）。随 AGEs 处理时间的增加，IL-1β的蛋白含量与β-actin 的比值逐渐增高，从 0.25±0.12 到 1.05±0.11，P 值均<0.05；mRNA的相对表达量也逐渐增高，与对照组相比，24h 组的 mRNA 表达水平升高了 9.84倍，P 值均<0.05，如图 1-3。
图 1-4 AGEs 对人关节软骨细胞 TNF-α的影响（时效）。100μg/ml BSA-AGEs 刺激人关节软骨细胞 0-24h，Western Blot 和 q-PCR 分别检测 TNF-α蛋白浓度和 mRNA 水平。（A）WesternBlot 检测结果；（B）Western Blot 条带灰度分析结果；（C）q-PCR 分析结果。所有数据以X±SD 表示，n=3。*p<0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，与对照组（0h）比较。3.2 AGEs 对人关节软骨细胞 AMPK 和 SIRT-1 表达的影响在不同剂量（25μg/ml, 50μg/ml, 75μg/ml, 100μg/ml）的 BSA-AGEs 处理人关节软骨细胞 24h 后，使用 Western Blot 测定人关节软骨细胞内 AMPK 磷酸化水平和 SIRT-1 蛋白表达水平。结果显示，AMPK 磷酸化水平和 SIRT-1 蛋白表达水平均较对照组（0 μg/ml）明显降低（P<0.05）, 且均以 AGEs 浓度为 100μg/ml时作用最为明显。随 AGEs 浓度的增加，p-AMPK 与 AMPK 的比值逐渐减低，从 1.19±0.15 到 0.32±0.13，P 值均<0.05，如图 2-1。随 AGEs 浓度的增加，SIRT-1与β-actin 的比值逐渐减低，从 1.16±0.08 到 0.13±0.02，P 值均<0.05，如图 2-2。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Notch信号通路在膝骨关节炎软骨细胞凋亡中的作用研究[J]. 吴绍军,刘俊才,左银龙,李忠. 华西医学. 2018(09)
[2]骨性关节炎发病机制的研究进展[J]. 卫彦强,石继祥,纪斌,周强,章筛林,庞金辉. 医学综述. 2018(05)
[3]SIRT1功能的研究进展[J]. 刘璇,何继瑞. 西北国防医学杂志. 2018(01)
[4]肿瘤坏死因子-α在骨关节结核中的研究进展[J]. 梁思敏,蔡则成,马赫,戈朝晖. 宁夏医科大学学报. 2018(01)
[5]AMPK信号通路在糖尿病心肌病中的研究进展[J]. 张景怡,鲍翠玉,李晶. 中国药理学通报. 2017(11)
[6]微流控芯片流体剪切力和肿瘤坏死因子-α共同作用对大鼠软骨细胞表型的影响[J]. 石杨,盛坤,张敏,李洪敬,秦建华. 色谱. 2017(04)
[7]AMPK在骨关节炎发生发展中的作用[J]. 于辰曦,孙水. 生命的化学. 2016(06)
[8]膝骨关节炎软骨下炎症面积与关节液中白细胞介素-1含量的相关性研究[J]. 陈俊杰,庄汝杰,范续,张娅. 中医正骨. 2016(04)
[9]膝骨性关节炎患者关节液中MMP-7、MMP-9、TIMP-1、TNF-α的表达及意义[J]. 鲁海,卢超,张嘉良,刘文刚,倪新玲. 中国医药科学. 2015(22)
[10]白介素-1在骨关节炎发病机制中的研究进展[J]. 刘宏潇,殷海波,王海南. 中国骨伤. 2012(02)
本文编号：3236428
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