荷载miRNA-21-5P的工程外泌体的构建及其对DRG神经元作用及机制研究

发布时间：2021-06-22 20:34

　　周围神经损伤修复仍然是临床的研究热点之一。周围神经具有一定的再生能力,神经损伤后相关转录因子的激活与再生相关基因的调控是神经元能存活、轴突再生和功能恢复的关键。在此过程中micro RNA（miRNA）、外泌体等都发挥重要作用。miRNA可以调控基因的表达,miRNA通过靶向目标mRNA分子3’端非翻译区（3’-UTR）,抑制mRNA翻译或使其降解,负调控相关基因的表达。多种miRNA对神经损伤后调控再生相关基因密切相关。外泌体（Exo）是天然的纳米级药物载体,可以介导RNA等信号分子在细胞间传递,将遗传物质带入靶细胞,调控其相关基因的表达。目的:构建荷载miRNA-21-5p工程外泌体,并探讨其对DRG神经元作用及机制。为有效操控神经再生相关基因促进周围神经损伤修复提供实验研究基础。方法:（1）分离提取骨髓间充质干细胞（BMSCs）源性外泌体;（2）透射电镜鉴定外泌体;（3）纳米颗粒分析仪（NTA）测定外泌体粒径、浓度、zeta电位;（4）电穿孔法将外源性miR-21-5p/miR-NC加载到外泌体构建工程外泌体（5）Apogee超灵敏纳米流式细胞仪测定miRNA的加载率;（6）体外... 

【文章来源】：海南医学院海南省

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

本课题研究示意图

图2-2：透射电镜下的Exo

13图2-4图2-4：电穿孔将miR-21-5p导入外泌体时的荷载率(X±SD,n=5）。Fig.2-4：Loadingefficiencyofmir-21-5pintroducedintoexosomesbyelectroporation.(X±SD,n=5）注：***p<0.001;4讨论本实验所用外泌体的提取培养条件：取冻存的第五代BMSCs，复苏后在37℃5%的CO2培养箱中培养，传代2次扩增至8个T175CM2培养瓶，提取外泌体进行后续实验。我们课题组采用超滤加超离法提取外泌体，提取时间明显缩短，前期试验已对同样方法所提取Exo进行蛋白免疫印迹、电镜、NTA进行验证，证实提取无符合外泌体的特征。本实验在前期试验基础上，应用透射电镜及NTA对所提取外泌体进行鉴定。我们探讨了电穿孔法将外源性miR-21-5p导入BMSCs源性exosomes中可行性。我所用带荧光基团的miRNA，导入不带荧光基团外泌体，通过Apogee超灵敏纳米流式细胞仪激光激发后，测定带荧光和不带荧光的外泌体，比较后获得加载率。

【参考文献】：
期刊论文
[1]一种绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞源性外泌体的构建及鉴定[J]. 任瑞,谭晓红,鲁亚成,刘辉,张显芳,付媛,黄奎,黄奕弟,马志健,易西南.  神经解剖学杂志. 2017(02)
[2]Hoechst33342/PI双染法和TUNEL染色技术检测神经细胞凋亡的对比研究[J]. 杨细飞,贺春娥,汤瑞华,田生礼,刘建军.  癌变.畸变.突变. 2014(03)
[3]Apoptosis and the target genes of microRNA-21[J]. Lindsey E.Becker Buscaglia.  癌症. 2011(06)

博士论文
[1]Exosomes作为药物载体的功能化研究[D]. 朱延亮.东南大学 2017
[2]Non-coding RNAs调控DRG神经元参与神经再生的机制研究[D]. 周松林.苏州大学 2014
[3]牛分枝杆菌Mb1514基因的原核表达及功能分析[D]. 尹晓敏.中国农业大学 2013



本文编号：3243499