长链非编码RNA CRNDE在骨肉瘤增殖侵袭和上皮间质转化中的作用及分子机制研究

发布时间：2021-06-24 19:36

　　目的:（1）检测lnc RNA CRNDE在骨肉瘤组织及细胞系中的表达水平,分析表达水平。（2）设计并筛选出用于转染的高效靶向沉默骨肉瘤细胞系lnc RNA CRNDE的si RNA序列并以此靶向沉默lnc RNA CRNDE,研究其对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移、侵袭等肿瘤生物学行为和荷瘤裸鼠皮下移植瘤生长的影响。（3）检测启动子SP1表达增高或降低对Lnc RNA的表达的影响。（4）研究lnc RNA CRNDE在骨肉瘤细胞中的分子机制,为将来骨肉瘤靶向治疗研究提供理论基础。方法:（1）应用q RT-PCR技术检测lnc RNA CRNDE在骨肉瘤组织标本和相应瘤旁组织中的表达水平,及骨肉瘤细胞系和人正常成骨细胞系中的表达水平,并应用统计学模型处理数据。（2）应用CCK8和细胞平板克隆形成实验检测骨肉瘤细胞系增殖能力;通过流式细胞仪Annexin V-FITC/PI染色细胞凋亡检测试剂盒检测骨肉瘤细胞系的凋亡水平;通过流式细胞仪PI染色细胞周期检测试剂盒检测骨肉瘤细胞系细胞周期的变化;通过Transwell迁移实验、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测骨肉瘤细胞系的... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

骨肉瘤细胞系和组织中的CRNDE表达

SP1调控OS的CRNDE表达

27 3.CRNDE 对骨肉瘤细胞增殖的影响A）用非特异性 siRNA，si-CRNDE1 或 si-CRNDE2 转染 48 小时后，UNNG / HOS 和 MG63 细胞中 CRNDE 的相对表达水平。B）CCK8 测定用于测定 si-CRNDE1 和 si-CRNDE2 转染的 MNNG/HOS， U20S 细胞的细胞活力。C）细胞集落形成实验测定以测定 si-CRNDE2 转染的 MNNG/HOS，M20S 细胞和对照细胞的克隆能力。D）EdU 染色测定 si-CRNDE2-转染的 MNNG/HOS，MG63 和 U20S 细胞。红色，EdU 染色分裂细胞; 蓝色，Honchest33342 染色核。放大倍数×例尺=100μm。 所有实验均至少独立重复 3 次，平均值±SD。 * P <0* P <0.01

【参考文献】：
期刊论文
[1]宫颈癌中长链非编码RNA CRNDE表达及其临床意义[J]. 韩懿,劳美琼,雷巧如,李艳娜.  中国肿瘤临床. 2015(14)



本文编号：3247707