阻滞PERK信号通路增强人骨肉瘤HOS细胞对MPPa-PDT疗法的敏感性
发布时间：2021-06-28 08:57
目的:观察蛋白激酶样内质网激酶（RNA-activated protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase,PERK）通路在焦脱镁叶绿酸-a甲酯介导的光动力疗法（pyropheophorbide-a methyl ester-mediated photodynamic therapy,MPPa-PDT）诱导人骨肉瘤HOS细胞凋亡?自噬中的作用,并探讨阻滞PERK通路增强人骨肉瘤HOS细胞对MPPa-PDT敏感性的影响及机制?方法:MPPa-PDT处理人骨肉瘤HOS细胞后以Hoechst染色观察胞核形态学变化。以空白组、MPPa组、LED组为对照组,以MPPa-PDT处理组（MPPa-PDT）、MPPa-PDT联合PERK通路抑制剂GSK2656157处理组（MPPa-PDT+GSK2656157）、MPPa-PDT联合自噬抑制剂Bafilomycin A1处理组（MPPa-PDT+Bafilomycin A1）、MPPa-PDT联合siRNAp21（MPPa-PDT+siRNAp21）为实验组,以Western blot检测PERK通路...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
荧光显微镜观察各组细胞凋亡形态变化(Hoechst染色)
重庆医科大学硕士研究生学位论文Figure 1. Typical morphological changes of apoptosis in HOS cells by MPPa-PDT wereobserved using a fluorescence microscopy (Hoechst staining)流式细胞仪检测结果提示，MPPa-PDT 处理 HOS 细胞 12 h 后 MPPa-PDT 组凋亡率为（30.70±2.28）%，显著高于空白组（9.81±1.10）%、MPPa 组（10.69±1.24）%、LED 组（10.65±1.65）%（P<0.05，图 2A、B）。Western blot 检测结果显示：空白组 MPPa 组、LED 组凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3、Cleaved-PARP 表达差异均无统计学意义( P > 0. 05) ；MPPa-PDT处理 HOS 细胞 3、6、12 h 后，Cleaved-caspase3、Cleaved-PARP 表达呈升高趋势，与各对照组比较，差异均具有统计学意义( P < 0. 05, 图 2C、D)。
图 4 Western blot 检测 MPPa-PDT 诱导 PERK、p-PERK、ATF4、CHOP 蛋白表达Figure 4.The expressions of PERK, p-PERK, ATF4 and CHOP induced by MPPa-PDT weredetected by Western blotting. (Aand B)At 3 h, 6 h and 12 h, whole-cell lysate was harvestedfor the analysis of the changes of proteins expressions including PERK, p-PERK, ATF4 andCHOP by Western blotting. The values are means of 3 independent experiments ± SD. a: P <0.05 versus groups of control, Mppa and LED.2.3 MPPa-PDT诱导人骨肉瘤HOS细胞出现自噬小泡及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62 的表达透射电镜结果显示：MPPa-PDT 处理 HOS 细胞后，胞内出现大量双层膜的囊泡状结构，即为自噬小泡。其余各对照组未见自噬小泡大量出现，如黑色箭头所示（图 5A）。Western blot 检测结果显示：空白组、MPPa 组、LED 组 LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62表达差异均无统计学意义（P>0.05）；MPPa-PDT 处理 HOS 细胞 3、6、12 h 后，
【参考文献】：
期刊论文
[1]骨肉瘤的诊断及治疗进展[J]. 黄志鹏,宋科官. 国际骨科学杂志. 2018(03)
[2]光动力疗法的抗肿瘤作用及其机制的研究进展[J]. 孙旭,孟宪瑛,王瑶琪,杨帅,逄仁柱,李勇,石亮. 吉林大学学报(医学版). 2018(01)
[3]焦脱镁叶绿酸-a甲酯介导的光动力疗法诱导人骨肉瘤MG63细胞凋亡的研究[J]. 陶勇,黄秋,欧云生,尹航,陈艳阳,涂平华. 中国修复重建外科杂志. 2016(06)
[4]MPPa-PDT诱导人骨巨细胞瘤细胞自噬[J]. 黄秋,涂平华,欧云生,刘渤,陶勇,尹航. 第三军医大学学报. 2015(17)
本文编号：3254018
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
荧光显微镜观察各组细胞凋亡形态变化(Hoechst染色)
重庆医科大学硕士研究生学位论文Figure 1. Typical morphological changes of apoptosis in HOS cells by MPPa-PDT wereobserved using a fluorescence microscopy (Hoechst staining)流式细胞仪检测结果提示，MPPa-PDT 处理 HOS 细胞 12 h 后 MPPa-PDT 组凋亡率为（30.70±2.28）%，显著高于空白组（9.81±1.10）%、MPPa 组（10.69±1.24）%、LED 组（10.65±1.65）%（P<0.05，图 2A、B）。Western blot 检测结果显示：空白组 MPPa 组、LED 组凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3、Cleaved-PARP 表达差异均无统计学意义( P > 0. 05) ；MPPa-PDT处理 HOS 细胞 3、6、12 h 后，Cleaved-caspase3、Cleaved-PARP 表达呈升高趋势，与各对照组比较，差异均具有统计学意义( P < 0. 05, 图 2C、D)。
图 4 Western blot 检测 MPPa-PDT 诱导 PERK、p-PERK、ATF4、CHOP 蛋白表达Figure 4.The expressions of PERK, p-PERK, ATF4 and CHOP induced by MPPa-PDT weredetected by Western blotting. (Aand B)At 3 h, 6 h and 12 h, whole-cell lysate was harvestedfor the analysis of the changes of proteins expressions including PERK, p-PERK, ATF4 andCHOP by Western blotting. The values are means of 3 independent experiments ± SD. a: P <0.05 versus groups of control, Mppa and LED.2.3 MPPa-PDT诱导人骨肉瘤HOS细胞出现自噬小泡及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62 的表达透射电镜结果显示：MPPa-PDT 处理 HOS 细胞后，胞内出现大量双层膜的囊泡状结构，即为自噬小泡。其余各对照组未见自噬小泡大量出现，如黑色箭头所示（图 5A）。Western blot 检测结果显示：空白组、MPPa 组、LED 组 LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62表达差异均无统计学意义（P>0.05）；MPPa-PDT 处理 HOS 细胞 3、6、12 h 后，
【参考文献】：
期刊论文
[1]骨肉瘤的诊断及治疗进展[J]. 黄志鹏,宋科官. 国际骨科学杂志. 2018(03)
[2]光动力疗法的抗肿瘤作用及其机制的研究进展[J]. 孙旭,孟宪瑛,王瑶琪,杨帅,逄仁柱,李勇,石亮. 吉林大学学报(医学版). 2018(01)
[3]焦脱镁叶绿酸-a甲酯介导的光动力疗法诱导人骨肉瘤MG63细胞凋亡的研究[J]. 陶勇,黄秋,欧云生,尹航,陈艳阳,涂平华. 中国修复重建外科杂志. 2016(06)
[4]MPPa-PDT诱导人骨巨细胞瘤细胞自噬[J]. 黄秋,涂平华,欧云生,刘渤,陶勇,尹航. 第三军医大学学报. 2015(17)
本文编号：3254018
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